本发明涉及将非天然氨基酸掺入到真核细胞的目的蛋白质中的方法，所述方法包括以下步骤：i)提供表达正交tRNA合成酶‑tRNA对的真核细胞、编码所述目的蛋白质的目的核酸序列和突变体eRF1，所述突变体eRF1具有与SEQ ID NO：4的人野生型eRF1序列具有至少60％序列同一性的氨基酸序列，所述目的核酸序列在用于掺入非天然氨基酸的位置上包含由tRNA识别的密码子；ii)在待掺入至由所述目的核酸序列编码的蛋白质中的非天然氨基酸存在的情况下培养所述真核细胞，其中所述非天然氨基酸是正交tRNA合成酶的底物；和iii)培养真核细胞以允许通过正交tRNA合成酶‑tRNA对将所述非天然氨基酸掺入目的蛋白质。本发明还涉及用途、宿主细胞、组合和试剂盒。
