本发明提出了一种鉴定红螯螯虾遗传性别的SNP标记及其所用引物对和应用。本发明SNP标记的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示,SNP标记的核苷酸序列中第229bp碱基位置表现为TG杂合的是雌性个体,SNP标记的核苷酸序列中第229bp碱基位置表现为TT纯合的是雄性个体;本发明还给出了上述SNP标记所用的引物对,并给出了上述SNP标记在鉴定红螯螯虾遗传性别中的应用。本发明的SNP标记是与遗传性别相关的SNP标记,通过SNP标记可以成功鉴定红螯螯虾的遗传性别,SNP标记在鉴定雄性红螯螯虾时的成功率超过90%,在鉴定雌性红螯螯虾时的成功率超过80%,从而指导红螯螯虾的育种和养殖,提高经济收益。
一种靶向IAG基因的dsRNA,所述dsRNA以IAG基因为依据构建重组载体,并以所述重组载体为模板体外合成;所述IAG基因的序列如SEQ ID No.1所示。本发明公开的dsRNA具有针对红螯螯虾IAG基因的靶向性,能够高效率干扰IAG靶基因的表达,并且制备得到的dsRNA核酸脂质体对靶基因的沉默效率接近95%,在红螯螯虾分化关键时期干扰IAG靶基因,最终达到红螯螯虾性逆转的目的。
本发明提供一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交的方法,属于原位杂交技术领域,包括性腺组织包埋、石蜡切片、原位杂交和拍照记录,其中原位杂交采用探针序列为如SEQ ID NO.3所示。本发明探针对dsx基因的组织定位有明确的特异性,实现了对dsx基因mRNA水平的显示作用;本发明在红螯螯虾中建立了石蜡切片mRNA原位杂交的方法来研究相关基因在性腺中的表达模式,能够清晰地描述红螯螯虾性别相关基因在性腺中的表达定位;本发明方法在石蜡切片脱蜡效果佳的同时避免组织收缩和细胞变形,使得组织仍保持在原位,组织形态保持完整,还能提高酶解效果,使得细胞着色好,核质分明,最终提高原位杂交的准确性。