本申请涉及生物技术领域，尤其涉及一种生物素化外源重组蛋白用表达载体及制备方法和应用；所述表达载体包括包括VV启动子，VV启动子用于替换表达载体的Tac启动子，VV启动子是通过改造AV3启动子所得的改造启动子，VV启动子的核苷酸序列包括与如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列同源性＞90％的核苷酸序列；通过改造表达载体的AV3启动子得到VV启动子，并通过VV启动子替换表达载体上原始的Tac启动子，可以通过嵌合作用，提高表达蛋白的表达效率，因此可以通过改造启动子序列，改善表达载体在表达外源蛋白时的表达效率，从而提高表达载体在表达生物素化外源重组蛋白的表达率。
本发明公开了一种在哺乳表达系统中表达的融合蛋白及其制备方法，所述融合蛋白至少包括两种肽：第一种肽，具体为如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列或为与SEQ ID NO.1所示序列具有至少85％同源性且功能相同的氨基酸序列；第二种肽，具体为目标肽。第一种肽能够有效促进目标肽在哺乳表达系统中的表达，使得目标肽从不表达到表达或从低表达到高表达，为目标肽(尤其是小片段肽)在哺乳表达系统中的表达提供了一种新策略。
本申请涉及生物技术领域，尤其涉及抗人SEMA4D抗体及其制备方法和应用。所述抗人SEMA4D抗体能特异性地识别SEMA4D蛋白；所述抗人SEMA4D抗体包括第一抗体或第二抗体；所述第一抗体包括SEQ ID NO：1‑SEQ ID NO：37所示氨基酸序列中的任意一种，所述第二抗体序列满足如下至少一条：重链氨基酸序列包括SEQ ID NO：38‑SEQ ID NO：42所示氨基酸序列中的任意一种，轻链氨基酸序列包括SEQ ID NO：43‑SEQ ID NO：47所示氨基酸序列中的任意一种，得到多株亲和力较高的抗人SEMA4D抗体，提供了早期检测诊断标志物及治疗靶点，为联合抗体用药和控制肿瘤提供基础。
本申请涉及生物技术领域，尤其涉及一种外源表达蛋白的信号标志物、外源表达蛋白及其制备方法；所述信号标志物包括如SEQ ID NO.1所示的kozak序列、如SEQ ID NO.2所示的信号肽和如SEQ ID NO.3所示的无序序列；所述外源表达蛋白包括DDR1蛋白片段、MAGEA4蛋白片段和ACP3蛋白片段，DDR1蛋白、MAGEA4蛋白和ACP3蛋白的N端分别连接信号标志物；利用kozak序列增加外源表达蛋白在翻译阶段的表达效率的这一特性，再利用信号肽增加外源表达蛋白在分泌过程中跟细胞膜识别定位的准确性的这一特性，最后通过无序序列加快分泌蛋白跟细胞膜的结合速度，因此通过该信号标志物，可以综合提高外源表达蛋白的表达量和表达纯度。
本发明提供了一种HLA‑G全长蛋白及其表达载体、表达工程菌和制备方法，所述表达载体的表达区的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；所述工程菌包含所述的HLA‑G全长蛋白表达载体。所述HLA‑G全长蛋白由所述的HLA‑G全长蛋白表达工程菌经诱导表达和纯化制备得到。本发明采用优化的大肠杆菌表达系统，体外表达人HLA‑G全长蛋白，实现了人HLA‑G全长蛋白的高产量、高纯度表达；本发明提供人HLA‑G全长蛋白，包含跨膜区，且经过ELISA验证具有与天然蛋白相似的结构，该方法可以制备出高产量、高纯度、具有结构活性的人HLA‑G全长蛋白。
