本发明涉及分子免疫学领域。中国专利申请200610027311.2中公开了6个能激发人体抗结核杆菌的保护性免疫反应的抗原表位的分子模拟肽。本发明在此基础上,提供一种重组结核杆菌抗原多表位肽,它是含有SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的融合肽,本发明还提供了构建方法与用途。该多表位肽经细胞和动物实验验证,能激发高效而特异的抗结核感染保护性CTL免疫应答。本发明有助于对结核病的预防和治疗,尤其是对多耐药性菌株的控制,也有利于研究结核病中的分子、细胞作用机制,促进困扰临床的多耐药性难题的解决。