本发明公开了一种检测人类红细胞ABO血型基因分型的引物组、试剂盒及其在试剂中的应用,所述引物组包括24组,所述的24组引物组的序列表如SEQ ID No.1‑72所示;所述试剂盒包含所述的24组引物组中的至少22组引物组;所述试剂包括24组引物组或所述试剂盒。引物经过了优化设计,具有相似的退火温度,能够实现24组引物在相同的PCR扩增条件下同时扩增,每个PCR反应体系的体积只有1.15μL,DNA模板只需5~10ng,大大增加了检测效率和反应灵敏度;应用该引物组进行检测,具有速度快、成本低、灵敏性高及易于实现多位点联合检测等优点。