本发明提供了一种检测肺癌相关41基因的探针库、试剂盒及其应用,所述探针库包括有肺癌相关41基因捕获探针,所述肺癌相关41基因捕获探针为1464条,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1~1464所示,将所述探针库应用于下一代测序技术中,可同时高通量地对肺癌相关41基因进行检测,具有覆盖率高、准确性高等优点。所述探针库的检测基因纳入了41个与肺癌治疗敏感性、抗拒性、毒副反应相关的基因,其检测结果能够直接对肺癌治疗疗效和毒性反应进行预先评估,可帮助筛选出合适的药物和治疗方案,有助于医生进行治疗决策和患者的合理用药,同时,也可为未来的药物开发和提高治疗的精确性提供基本突变谱资料和检测策略。