本发明公开了一种牛源化CRISPR/boCas9基因编辑系统、方法及应用。一种牛源化CRISPR/boCas9基因编辑系统,包括boCas9蛋白和sgRNA;编码所述boCas9蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明根据牛细胞的密码子偏好性对外源Cas9基因进行优化,可以显著提高牛细胞中Cas9基因的转录和翻译效率,最终增加细胞中Cas9蛋白质的含量。结果显示:改造后的牛源化boCas9蛋白质表达量是野生型对照组Cas9的2倍,靶基因切割效率是野生型对照组的至少6倍。本发明方法能够有效提高CRISPR/boCas9基因编辑系统在牛细胞中的切割效率。
本发明公开了一种牛源化CRISPR/boCas13a基因编辑系统、方法及应用。一种牛源化CRISPR/boCas13a基因编辑系统,包括boCas13a蛋白和crRNA;编码所述boCas13a蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过密码子优化策略,对韦氏纤毛菌来源的Cas13a基因,根据牛细胞中的密码子编码偏好性进行全局优化,实现了韦氏纤毛菌来源的Cas13a基因在牛来源细胞中的高效基因编辑,为牛细胞中RNA编辑和转基因育种提供一种可靠的方法。