本发明属于免疫学领域,涉及一株针对猪δ冠状病毒S1蛋白构象表位的中和性单克隆抗体和分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。中和性单克隆抗体的重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示的CDR1、CDR2和CDR3;轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO:4、RAS、SEQ ID NO:5所示的CDR1、CDR2和CDR3。分泌该中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C2022248。本发明的单克隆抗体具有治疗和预防猪δ冠状病毒感染猪的临床效果,也可用于制备猪δ冠状病毒检测试剂或者试剂盒。