本发明公开了一种鉴定松毛虫赤眼蜂的方法及其专用引物与应用。本发明所提供的鉴定松毛虫赤眼蜂的引物,是下述核苷酸序列:1)正向引物是序列表中的SEQ ID №:1;2)反向引物是序列表中的SEQ ID №:2。鉴定松毛虫赤眼蜂的方法,是用上述鉴定松毛虫赤眼蜂的引物PCR扩增昆虫样品的基因组DNA,检测扩增产物,确定所述昆虫样品是否为松毛虫赤眼蜂。本发明还提供了一种包括上述鉴定松毛虫赤眼蜂的引物的PCR试剂盒。本发明的方法及试剂盒不仅能提高松毛虫赤眼蜂鉴定的效率和准确性,还能解决松毛虫赤眼蜂田间释放应用中的种群监测和生防效能评价问题,具有重要的理论意义和实际意义。