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[发明专利]一种从头合成壳寡糖的多酶催化体系及其全细胞生产方法-CN202210557773.4有效
发明人：方真;丁春华;沙冲;章文劼 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司
申请日： 2022-05-19 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种从头合成壳寡糖的多酶催化体系及其全细胞生产方法，属于合成生物学领域和生物医药制备技术领域。本发明通过AmgK、GlmU、NodC、NodB的组合，构建了以乙酰氨基葡萄糖为底物单元从头合成壳寡糖的一种多酶催化体外途径；利用该酶组合与辅因子再生系统的偶联，底物磷酸化速率和聚合速率得到调控，壳寡糖聚合度可控(DP10)、分子量均一(～1000Da)。在此基础上以大肠杆菌为底盘菌，将所述酶组合中的基因整合到表达载体或基因组中进行过表达，同时过表达K‑12自身的GlmS、GlmM、GlmU，获得以单一底物(乙酰氨基葡萄糖或葡萄糖)为前体从头合成壳寡糖的全细胞，在5L发酵罐中壳聚糖产量可达23.2g/L，在1000L发酵罐体系中壳聚糖产量达到20g/L以上，展现了巨大的工业生产价值。
一种从头合成寡糖催化体系及其细胞生产方法

[发明专利]一种不可逆合成燕窝酸的微生物细胞转化方法-CN202310060606.3在审
发明人：方真;丁春华;沙冲;章文劼 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司
申请日： 2023-01-17 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N9/90 文献下载
摘要：本发明公开了一种不可逆合成燕窝酸的多酶催化体系及其全细胞转化方法，属于合成生物学领域、食品加工和生物医药制备技术领域。本发明通过三种定向进化后优选的酶组合，构建了以乙酰基氨糖和丙酮酸为底物单元不可逆合成燕窝酸的一种多酶催化途径；利用该酶组合与辅因子再生系统的偶联，体外酶催化得到20.2g/L燕窝酸，底物转化率65％。在此基础上采用食品安全菌种为底盘菌，将所述酶催化途径的基因整合到表达载体或基因组中进行过表达，同时构建dCas9/CRISPRi系统，定向调节底物竞争途径对燕窝酸合成前体的消耗，所得到的全细胞在5L发酵罐中燕窝酸最高产量为～160g/L，底物转化率超过60％，展现了巨大的工业生产价值。
一种可逆合成燕窝微生物细胞转化方法

[发明专利]一种双途径合成壳寡糖的全细胞及其生产方法-CN202211677646.4在审
发明人：丁春华;沙冲;方真;章文劼 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司
申请日： 2022-12-26 - 公布日： 2023-04-14 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种双途径合成壳寡糖的全细胞及其生产方法，属于合成生物学领域和生物医药领域。本发明通过过表达N‑乙酰氨基葡萄糖转运蛋白、N‑乙酰氨基葡萄糖激酶、磷酸化N‑乙酰氨基葡萄糖变位酶、几丁质合成酶、脱乙酰基酶五种酶蛋白，并结合胞内已知的UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖的合成途径，组合构建了以葡萄糖和N‑乙酰氨基葡萄糖为前体的双途径合成壳寡糖的全细胞。本发明的全细胞，可以生产聚合度可控(DP10)、分子量均一(～1000Da)的壳寡糖。本发明采用全细胞生产的壳寡糖，最终获得胞外壳寡糖的含量可达20g/L，纯度较高，对于下游提取工艺降低了成本，同时全细胞生产方法具有过程简单、周期短、产量高等优势，工业化生产潜力明显。
一种途径合成寡糖细胞及其生产方法

[实用新型]可计量自动补料装置-CN202121257708.7有效
发明人：章文劼;陈孝伟 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司
申请日： 2021-06-07 - 公布日： 2021-11-23 - 主分类号： C12M1/36 文献下载
摘要：本实用新型涉及可计量自动补料装置。属于生物反应器技术领域，包括相互连接的发酵罐，计量罐，补料罐，液位传感器，平衡管，补料管，出料阀一，进料管，进料阀，小排汽阀一，小排汽阀二，手动阀门，蒸汽和冷凝水排放管，出料阀二，出料阀三，排放阀，排放管道，蒸汽阀及蒸汽管道。本实用新型结构简单，成本低廉，维修方便，维修费用低；执行机构采用气动隔膜阀，无死角，耐高温灭菌，解决了易染菌的问题；计量罐和补料管可自动蒸汽灭菌，经过简单改装，进料管也可实现自动灭菌，可简化操作，避免因操作不当造成补料装置灭菌不彻底。因此本实用新型具有很好的实用性。
计量自动装置

[发明专利]一种N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶的提取方法-CN202110873349.6在审
发明人：丁春华;章文劼 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司;拜启私人有限公司
申请日： 2021-07-30 - 公布日： 2021-09-10 - 主分类号： C12N9/80 文献下载
摘要：本发明公开了一种N‑乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶的提取方法，属于生物工程技术领域。本发明以含有N‑乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶的发酵液为原料，经过絮凝离心或陶瓷微滤膜收集微生物浓悬液，同时去除发酵过程中残留营养物成分；再通过高压均质使细胞壁破裂，释放出细胞内容物和目标酶，最后通过陶瓷微滤膜或超滤膜透析出富含有N‑乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶的溶液，同时截留去除细胞碎片成分。本发明在提升酶的提取回收率的同时，提取过程中物耗和废水产生量较少，实现了良好的经济效益和环保安全的效果。
一种乙酰氨基葡萄糖提取方法

[发明专利]一种利用复合絮凝剂制备N-乙酰氨基葡萄糖发酵清液方法-CN202110630095.5在审
发明人：章文劼;单志萍;章金元 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司
申请日： 2021-06-07 - 公布日： 2021-09-07 - 主分类号： C07H5/06 文献下载
摘要：本发明涉及利用一种复合絮凝剂制备N‑乙酰氨糖高密度发酵清液的方法。属于生物工程领域，具体步骤：将N‑乙酰氨基葡萄糖发酵液进行灭活；加入无机絮凝剂，搅拌，得到含有无机絮凝剂的N‑乙酰氨基葡萄糖发酵液；加入吸附剂和助滤剂，搅拌，加入已配置的有机高分子絮凝剂，搅拌均匀，静止絮凝30‑60min，得到N‑乙酰氨基葡萄糖发酵液的絮凝液；经过板框压滤，得到N‑乙酰氨基葡萄糖发酵清液。本发明中絮凝除杂工艺效果明显板框过滤后清液得率高，菌渣含水量低，复合絮凝减少了絮凝剂的用量。本工艺操作简单，且无三废排放，是一种环保、简单高效的制备乙酰氨糖发酵清液的方法。
一种利用复合絮凝制备乙酰氨基葡萄糖发酵方法

[发明专利]一种氨基葡萄糖有机酸盐的制备方法-CN202110630079.6在审
发明人：章文劼;单志萍 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司
申请日： 2021-06-07 - 公布日： 2021-09-03 - 主分类号： C07H5/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种氨基葡萄糖有机酸盐的制备方法，属于生物工程技术领域，包括氨糖的吸附分离、氨糖有机酸的浓缩、结晶、产品制备等步骤。首先将氨糖盐酸盐与阳离子树脂进行离子交换，用阳离子树脂吸附分离氨基葡萄糖盐酸盐中的氨糖，再用10‑30％浓度有机酸盐解析阳离子树脂上氨糖，形成粗品的氨基葡萄糖有机酸盐解析液，对得到的粗品的氨基葡萄糖有机酸盐解析液进行脱酸浓缩、结晶，得到高浓度的氨基葡萄糖有机酸盐，再进一步冷冻干燥。该工艺可制得较高纯度的氨糖有机酸盐产品，工艺简单，条件温和，无废酸排放，是一种环保、高效的氨糖有机酸盐的生产方法。
一种氨基葡萄糖有机酸制备方法

[发明专利]一种制备反式虾青素的方法-CN202110636442.5在审
发明人：章文劼;陈德全;丁春华 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司
申请日： 2021-06-08 - 公布日： 2021-08-17 - 主分类号： C12P23/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备反式虾青素的方法。属于生物制剂领域；具体步骤：以葡萄糖、氨水及硫酸铵作为原料，法夫酵母或大肠杆菌微生物作为生产菌种进行发酵，代谢合成虾青素，在合成过程中添加诱导剂进行细胞催化促使菌体合成反式虾青素；对发酵液进行浓缩并收集菌体，得含有菌体的浓缩液；再进行细胞破壁，得到破壁溶液；向破壁溶液中添加预胶化淀粉、倍他环糊精、普鲁兰多糖、明胶或羟丙甲纤维素，用乳化机进行均质乳化，进行包埋处理；对包埋过的混有虾青素的菌泥进行干燥成粉，获得反式虾青素。本发明具有生产工艺简单，生物利用率高，生产规模容易放大，生产成本低的优点，同时，本发明所获得的的虾青素为全反式结构，生物活性高，应用范围广。
一种制备反式虾青素方法

[发明专利]一种D-氨基葡萄糖盐酸盐的制备方法-CN202110630101.7在审
发明人：章文劼;丁春华;单志萍 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司
申请日： 2021-06-07 - 公布日： 2021-08-13 - 主分类号： C07H5/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种D‑氨基葡萄糖盐酸盐的制备方法。属于生物工程技术领域，具体步骤：首先，得到N‑乙酰氨基葡萄糖澄清溶液；将其进入到离子交换树脂柱中进行离交，得到纯净的N‑乙酰氨基葡萄糖溶液；再对其进行脱乙酰反应，得到脱乙酰反应的清液；再加入盐酸，制得D‑氨基葡萄糖盐酸盐溶液；对D‑氨基葡萄糖盐酸盐溶液进行蒸发浓缩、降温及过滤；得到D‑氨基葡萄糖盐酸盐粗晶体；将得到的D‑氨基葡萄糖盐酸盐粗晶进行溶解、过滤、重结晶，收集晶体、烘干；最终得纯品的D‑氨基葡萄糖盐酸盐。该工艺制得的盐酸氨糖纯度较高，工艺简单，生产过程酶反应条件温和，且树脂用量少，废盐酸的排放少，是一种环保、高效的氨基葡萄糖生产工艺。
一种氨基葡萄糖盐酸制备方法

[发明专利]N-乙酰氨基葡萄糖的分离和纯化方法-CN202010527878.6有效
发明人：丁春华;章文劼 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司;拜启私人有限公司
申请日： 2020-06-11 - 公布日： 2021-04-30 - 主分类号： C07H13/02 文献下载
摘要：本发明N‑乙酰氨基葡萄糖的分离和纯化方法，属于生物工程技术领域。本发明通过微生物发酵或者水解几丁质得到的含有N‑乙酰氨基葡萄糖的原料液，对原料液进行絮凝预处理，通过连续离心或压滤后去除微生物、蛋白质和多糖等悬浮固形物，获得澄清液。再经过双级离子交换层析去除带电荷的有机分子和无机盐等杂质。通过膜浓缩高效去除水分，提高目标产物的浓度。最后通过喷雾干燥或者进一步蒸发浓缩和结晶，最后干燥获得纯度超过99％的N‑乙酰氨基葡萄糖晶体。
乙酰氨基葡萄糖分离纯化方法

[实用新型]无菌取样装置-CN202020186371.4有效
发明人：章文劼 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司
申请日： 2020-02-19 - 公布日： 2020-11-03 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种无菌取样装置，取样口包括底座法兰、压盖，取样阀包括安装板、取样阀体；底座法兰自其外侧端面开设有沉孔，自沉孔底面向底座法兰内侧端面开设有渐扩的喇叭形通孔，底座法兰从其内侧与发酵罐开孔安装固定；取样阀体上设置有与内腔相通的流通孔、蒸汽管路、出样管路，内腔内设置有活动柱塞，活动柱塞与内腔间具有连通蒸汽管路、出样管路的环向间隙，取样阀体从其内侧穿设于安装板固定；安装板置于所述沉孔中，流通孔朝向所述喇叭形通孔，压盖从底座法兰外侧端面压合在安装板上并固定。取样阀与取样口可拆装，便于维修；取样即发酵罐内的发酵液，消毒彻底完全无死角。
无菌取样装置

[实用新型]转臂快开式釜盖-CN202020186320.1有效
发明人：章文劼 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司
申请日： 2020-02-19 - 公布日： 2020-10-30 - 主分类号： B01J19/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种转臂快开式釜盖，包括转臂、釜盖，釜盖上方竖向设置有固定的连接柱，连接柱包括连接螺母、锁紧螺母、螺杆，连接螺母竖向设置固定在釜盖上方，螺杆下端与连接螺母旋接，锁紧螺母套设于螺杆上旋接将螺杆固定，转臂其横向段末端与螺杆非接触连接，螺杆顶端设置有第一单向推力球轴承，手轮其转轴下端穿设于第一单向推力球轴承并与螺杆上端旋接；转臂其竖向段末端与和釜体固定的支撑件旋转连接，旋转轴为竖向段中心线。本实用新型结构可靠、使用方便，旋转手轮开盖或关盖，以及釜盖上升后向两旁旋转时都很轻便省力，釜盖打开、关闭时不用搬动，既节省人力又可节约地方；可拆卸连接结构便于维修，延长了釜盖操作次数和使用寿命。
转臂快开式釜盖

[实用新型]小型发酵罐补料装置-CN202020097653.7有效
发明人：章文劼 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司
申请日： 2020-01-16 - 公布日： 2020-10-27 - 主分类号： C12M1/24 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种小型发酵罐补料装置，包括蠕动泵、补料瓶、平衡气管以及由两根补料插针构成的补料接头，补料瓶的瓶盖上插入长针管、短针管，两者的上端均伸出于补料瓶外，长针管的下端伸入补料瓶内至液面下方，短针管的下端伸入补料瓶内在液面上方，蠕动泵上的补料软管连接连通长针管的上端与一根补料插针的接口端，平衡气管连接连通短针管的上端与另一根补料插针的接口端，补料插针的插针端与发酵罐罐盖上的补料口连接。本实用新型通过平衡气管直接连通发酵罐和补料瓶平衡内部压力，提高补料量的控制精度，补料插针扎孔稳定，杜绝因手工扎偏而影响气密性甚至造成补料液沿针眼外泄的现象。
小型发酵罐补料装置

[实用新型]釜盖自动升降装置-CN202020081834.0有效
发明人：章文劼;章金元 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司
申请日： 2020-01-15 - 公布日： 2020-10-27 - 主分类号： B01J19/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种釜盖自动升降装置，包括线性电动推杆、导杆、滑套、连接座，所述线性电动推杆、导杆竖向设置，所述导杆固定，所述滑套套设于所述导杆上，所述滑套与釜盖通过所述连接座固定连接，所述线性电动推杆的套管固定，推杆上部与所述连接座固定连接。本实用新型的优点是：结构紧凑，能够省力、安全、可靠的进行反应釜釜盖的升降操作，以几个组件装卸，安装维护方便，便于在靠近反应釜的空余位置铺设安装反应釜运行所需的各种流体的管路和泵阀等附件，从而也使整套反应釜设备结构紧凑，节省空间。
自动升降装置

[实用新型]防护型发酵罐用多路流加补料装置-CN202020082110.8有效
发明人：章文劼 -专利权人： 江苏海飞生物科技有限公司
申请日： 2020-01-15 - 公布日： 2020-10-27 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种防护型发酵罐用多路流加补料装置，补料装置具有补料针管、消毒护套，补料针管包括管连接体、套管、补料小管，管连接体和套管从各自的内端对接固定，在两者的外端端面上开设有至少两组相对通孔，每组相对通孔中穿设一根补料小管并固定密封，补料小管的插针端伸出于管连接体的外端端面，接管端伸出于套管的外端端面，发酵罐罐盖补料口无需使用硅胶塞，一个补料针管可满足多路分别流加补料的需要，解决了罐盖空间不足的问题，避免了因硅胶塞插针掉渣或开裂而产生污染的问题，与补料口安装连接可靠，使用方便，密封性好，消毒护套与补料针管配套使用，保护消毒结束的补料针管，避免补料针管因较长时间暴露在空气中造成二次污染。
防护发酵罐用多路流加补料装置

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