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- [发明专利]一种BCR免疫组库全长扩增的三代建库测序方法-CN202010603495.2有效
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方涛
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武汉菲沙基因信息有限公司
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2020-06-29
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2023-05-05
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C12Q1/6869
- 本发明公开了一种BCR免疫组库全长扩增的三代建库测序方法,步骤包括:1)根据BCR一致性序列的恒定区设计与合成引物;2)通过Oligo dT引物和BCR Template Switching Oligo引物的作用下合成第一链cDNA;3)BCR cDNA的全长第一轮和第二轮的扩增;4)BCR全长扩增子片段混样;5)文库构建;6)进行三代测序。本发明通过在BCR恒定区的保守区域设计多重引物,覆盖整个BCR的全长序列。在进行BCR序列扩增时,为进一步提高3’端扩增的有效性,设计了多组半巢式引物,通过半巢式引物的匹配筛选即可获得覆盖整个BCR全长的扩增子片段。通过PacBio建库流程,在扩增子的两端添加带有barcode的测序接头,即可进行PacBio测序,通过拆分与数据校正后获得准确率在99%以上的HiFi Reads。
- 一种bcr免疫全长扩增三代建库测序方法
- [发明专利]一种单细胞TCR免疫组库全长建库测序方法-CN202210080115.0在审
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陈东生;程艳兵;毛勇
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武汉菲沙基因信息有限公司
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2022-01-24
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2022-04-29
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C12Q1/6806
- 本发明公开了一种单细胞TCR免疫组库全长建库测序方法,涉及单细胞TCR免疫组库领域,其技术方案包括以下步骤:步骤一:引物合成:通过引物公司对需要的引物序列进行合成,其中,3’特异性引物在使用时混合到一起使用,为混合引物,扩增时用混合引物进行扩增;步骤二:单细胞悬液的制备:抽取新鲜的外周血5mL至EDTA抗凝管中,将淋巴细胞分离液和血样在20℃水浴箱中复温20min;步骤三:单细胞油包水的制备与cDNA的合成扩增:将36.3μL主混合添加到冰上的PCR管中;起始的细胞量要求非常低,不管是100个细胞,还是1.6万个细胞,均可直接用该方法进行单细胞cDNA的合成与后续的TCR免疫组全长建库测序,在技术水平上实现了仅需要少量细胞即可获得TCR免疫组库信息。
- 一种单细胞tcr免疫全长建库测序方法
- [发明专利]一种桑树基因组DNA的高效提取方法-CN202010275322.2在审
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吴冬晴
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武汉菲沙基因信息有限公司
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2020-04-09
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2020-07-28
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C12N15/10
- 本发明涉及一种桑树基因组DNA的高效提取方法,对比于经典的CTAB法,本发明的方法在裂解植物细胞之前增加了去杂质buffer清洗过程及优化了提取工艺。其中的去杂质buffer提供一个缓冲环境,一方面防止桑树叶片组织中核酸被破坏,另一方面利用PEG8000在温和条件下聚集沉降破裂组织中的多糖、多酚次级代谢产物等大分子,从而实现离心去除杂质的目的;后续依次经酚/氯仿/异戊醇溶液、氯仿/异戊醇溶液、异丙醇三次抽提可有效去除蛋白质等物质。大量实验表明,本发明的方法提取的桑树DNA不再粘稠,琼脂糖电泳检测结果中DNA对应的条带清晰锐利、无明显拖尾,提取过程也相对容易、高效;同进,提取的DNA满足后续建库、上机测序、PCR反应等相关操作要求。
- 一种桑树基因组dna高效提取方法
- [发明专利]一种红树基因组DNA的高效提取方法-CN202010274587.0在审
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吴冬晴
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武汉菲沙基因信息有限公司
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2020-04-09
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2020-07-28
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C12N15/10
- 本发明涉及分子生物学技术领域,具体涉及一种红树基因组DNA的高效提取方法。该提取方法对比于经典的CTAB法,在裂解植物细胞之前增加了去杂质buffer清洗过程。其中的去杂质buffer提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;并在此环境下,充分利用PEG8000聚集沉降红树叶片内的多糖、次级代谢产物等大分子,从而实现离心去除杂质的目的。大量实验表明,利用本发明的方法提取的DNA不再粘稠,琼脂糖电泳检测结果中DNA对应的条带清晰锐利、无明显拖尾,提取过程也相对容易、高效;同时,提取的DNA满足后续建库、上机测序、PCR反应等相关操作要求。本发明的提取方法显著提高了DNA提取效率和DNA纯度。
- 一种红树基因组dna高效提取方法
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