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[发明专利]一种无血清NK分化培养基及其制备方法-CN202110787637.X有效
发明人：曹哲厚;韦俊;吴立前;马悦悦;王振坤 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2021-07-13 - 公布日： 2023-03-24 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明提供一种无血清NK分化培养基及其制备方法，所述培养基以stemspan SFEMⅡ为基础培养基，包括浓度10‑100ng/ml的IL‑2，浓度10‑100ng/ml的SCF，浓度10‑100ng/ml的IL‑7，浓度1‑10ng/ml的IL‑15,浓度5‑50ng/ml的Flt3L，浓度5‑50ng/ml的IL‑3，浓度0.5‑2uM的UM729，将经DPBS清洗的造血干细胞，以10万/ml的接种数接种到培养基中，每隔每隔三天半换液一次，培养至第14天即可。本发明通过优选培养基成分组成与含量，保证了NK细胞的分化，培养基不使用血清降低了污染源，避免了其他细胞作为饲养细胞，使细胞更安全。
一种血清 nk 分化培养基及其制备方法

[发明专利]一种从诱导多能干细胞分化CD4+-CN202210171731.7在审
发明人：韦俊;季伟;王振坤;曹哲厚 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2022-02-24 - 公布日： 2022-05-31 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及免疫学技术领域，具体涉及一种从诱导多能干细胞分化CD4+非T细胞的方法，包括：S1、PSC细胞维持培养；S2、制作EB(拟胚体)；S3、分化EB至中胚层；S4、分化中胚层至CD34+的造血祖细胞；S5、分化CD34+的造血祖细胞至CD4+非T免疫细胞，本发明从人的iPSC细胞出发，从根本上解决了CD4+非T细胞的来源和数量问题，在医学上有着十分重要的作用。
一种诱导多能干细胞分化 cd4 base sup

[发明专利]一种新型无血清细胞冻存液配方-CN202210171965.1在审
发明人：曹哲厚;韦俊;吴立前;马悦悦 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2022-02-24 - 公布日： 2022-05-13 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种新型无血清细胞冻存液配方，其组成包括以人血清白蛋白为主体，添加10％的DMSO、13.3％的复方电解质注射液和16.70％的右旋糖苷。本发明通过优化冻存液配方，显著提高了细胞的存活率，降低了污染源，提供了新型无血清细胞冻存液,易制备、易保存、复苏后的细胞活性极高且避免了血清存在的潜在危险。
一种新型血清细胞冻存液配方

[发明专利]一种无血清CIK扩增培养方法-CN202111129839.1在审
发明人：曹哲厚;吴立前;马悦悦 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2021-09-26 - 公布日： 2021-12-21 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种无血清CIK扩增培养方法，包括以无血清培养基康宁KBM581淋巴细胞无血清培养基作为基础培养基，具体步骤如下：S1.添加IL‑2、IL‑21、IL‑15和0KT‑3因子作为添加剂；S2.将基础培养基于无菌箱中放置8～12天，得到高纯度的CIK细胞。通过以本发明提供的无血清CIK培养基及扩增培养方法，耗时短、操作简单、扩增效率高、纯度良好的CIK细胞的培养方法。利用本发明，10天即可获得高纯度的CIK细胞；本发明不需要使用人血浆或胎牛血清，避免了血清存在的潜在危险。
一种血清 cik 扩增培养方法

[发明专利]一种多能干细胞来源的角质形成细胞的培养方法-CN202110950784.4在审
发明人：曹哲厚;吴立前;马悦悦 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2021-08-18 - 公布日： 2021-10-29 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种多能干细胞来源的角质形成细胞的培养方法，包括培养基以KeratinocyteGrowthMedium2为基础培养基，Matrigel胶作为包被基质，ROCK抑制剂作为培养基添加剂。本发明通过优选培养基及培养方案，显著促进干细胞来源的角质形成细胞的贴壁效果，利用该方法培养，细胞可以持续传5～10代以上，有利于促进角质形成细胞的大规模的生产和应用。
一种多能干细胞来源角质形成细胞培养方法

[发明专利]一种用因子法从外周血中扩增NK细胞的培养基及方法-CN202110757127.8在审
发明人：曹哲厚;吴立前;马悦悦 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2021-07-05 - 公布日： 2021-09-21 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种用因子法从外周血中扩增NK细胞的培养基及方法，涉及一种用因子法从外周血中扩增NK细胞的培养基，包括包被液、刺激培养基和扩增培养基，包被液包括DPBS磷酸缓冲液、NKp46和CD137，刺激培养基包括K581基础培养基、IL‑2、IL‑18、IL‑15、IL‑21、OK432、IFN‑γ、NEAA、谷氨酰胺、PHA和自体灭活血浆，扩增培养基包括K581基础培养基、IL‑2和AB血清。本发明避免了NK细胞与其它来源细胞共培养的问题，避免了一部分污染源，使得到的细胞不存在未知风险，更为安全；同时通过采用包被、刺激两个阶段，合理、逐步地激活NK细胞，再通过扩增阶段达到大量扩增NK细胞的目的，整个过程简单且高效。
一种因子外周血中扩增 nk 细胞培养基方法

[发明专利]一种含有细胞因子的可将造血干细胞分化为自然杀伤细胞的培养基及其分化方法-CN202110767257.X在审
发明人：曹哲厚;吴立前;马悦悦 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2021-07-07 - 公布日： 2021-09-14 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种含有细胞因子的可将造血干细胞分化为自然杀伤细胞的培养基，属于生物技术领域，包括如下成分：IMDM培养基、DMEM‑F12培养基和stemlineⅡ造血干细胞培养基、葡萄糖、L‑谷氨酰胺、丙酮酸钠、亚硒酸钠、非必须氨基酸以及细胞因子。本发明使用纯细胞因子法配制培养基，避免了血清的使用，降低了污染源从而避免污染；本发明避免了一些其他细胞系作为饲养诱导条件，使分化出的细胞更为安全，降低未知风险。
一种含有细胞因子造血干细胞化为自然杀伤细胞培养基及其分化方法

[发明专利]一种提高多能干细胞分化成造血干细胞的效率的培养基及方法-CN202110652831.7在审
发明人：曹哲厚;吴立前;韦俊;马悦悦;王振坤 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2021-06-11 - 公布日： 2021-09-10 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高多能干细胞分化成造血干细胞的效率的培养基及方法，包括第一阶段培养基、第二阶段培养基和第三阶段培养基；所述第一阶段培养基包括E8完全培养基、SCF、rhG‑CSF、VEGF、PDGF；所述第二阶段培养基包括E6基础培养基、CHIR99021、VEGF、SCF、IL‑3、CSF；所述第三阶段培养基包括StemlineⅡ基础培养基、SCF、HGH、Flt3L、EPO、EGF、新型的嘧啶吲哚化合物；本发明通过适当使用一种用新型的嘧啶吲哚化合物配合上述三种特定成分和浓度的诱导多能干细胞分化成造血干细胞的培养基，大大提高了多能干细胞向造血干细胞分化的效率，使短期内可以获得大量的体外培养造血干细胞。
一种提高多能干细胞化成造血效率培养基方法

[发明专利]一种低成本多能干细胞分化造血干细胞的培养基及培养方法-CN202110652833.6在审
发明人：曹哲厚;韦俊;吴立前;马悦悦 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2021-06-11 - 公布日： 2021-09-10 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：本发明涉及一种低成本多能干细胞分化造血干细胞的培养基，包括第一阶段培养基和第二阶段培养基；所述第一阶段培养基包括DMEM/F12基础培养基、SCF、rhG‑CSF、VEGF、PDGF、FGF2、NODAL、亚硒酸钠、L‑抗坏血酸‑2‑磷酸酯镁盐、AB血清；所述第一阶段培养基中所述的SCF、rhG‑CSF、VEGF、PDGF、FGF2、NODAL的终浓度比为(1‑2)∶(1‑2)∶(0.5‑1)∶(1‑2)∶(1‑4)∶(1‑4)。与现有技术相比，本发明具备如下有益效果：本发明通过使用低成本培养基及一些必要的细胞因子代替高成本培养基，降低了多能干细胞分化成造血干细胞的成本，为今后造血干细胞的使用提供更加切实可行的方案。
一种低成本多能干细胞分化造血培养基培养方法

[发明专利]一种低成本且高灵敏度的体外检测hESC分化来源功能细胞中hESC残留的方法-CN202110727789.0在审
发明人：曹哲厚;吴立前;王梦岩 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2021-06-29 - 公布日： 2021-08-10 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明公开了一种低成本且高灵敏度的体外检测hESC分化来源功能细胞中hESC残留的方法，包括以下步骤：S1：将hESC与hESC‑MSC按照比例进行混样并标明组份；S2：各组细胞样品进行RNA提取：S3：RNA定量并反转录以得到反转录产物；S4：H‑ESRG基因引物设计，该引物为跨内含子引物；S5：采用qPCR检测反转录产物中H‑ESRG基因mRNA水平的表达。本发明使用H‑ESRG基因检测人hESC残留，并采用低成本的SYBR Green的qPCR方法检测，测得人hESC到最低检测限为0.0025％。在测得最低检测限相同情况下，使用本检测方法所用的成本较低，相关系数接近1，准确性高。
一种低成本灵敏度体外检测 hesc 分化来源功能细胞残留方法

[发明专利]一种多能干细胞诱导分化成造血干细胞的培养基及方法-CN202110579003.5在审
发明人：曹哲厚;韦俊;吴立前;马悦悦;李静静 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2021-05-26 - 公布日： 2021-08-06 - 主分类号： C12N5/0735 文献下载
摘要：本发明公开了一种多能干细胞诱导分化成造血干细胞的培养基，包括第一阶段培养基、第二阶段培养基和第三阶段培养基；所述第一阶段培养基包括E8完全培养基、BMP4、rhG‑CSF、CHIR99021、PDGF、IGF‑Ⅰ；所述第二阶段培养基包括E6基础培养基、SB4315424、VEGF、SCF、TPO、IL‑3、CSF；所述第三阶段培养基包括StemlineⅡ基础培养基、VEGF、SCF、HGH、IL‑3、Flt3L、EPO、EGF；本发明通过使用纯细胞因子法配制培养基，避免了血清的使用，降低了污染源从而避免污染；本发明避免了一些其他细胞系作为饲养诱导条件，使分化出的细胞更为安全，降低未知风险。
一种多能干细胞诱导化成造血培养基方法

[发明专利]一种NK培养基及其扩增培养方法-CN202110145009.1在审
发明人：曹哲厚;杨翅春;林晓杰;曾琪;张扬 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2021-02-02 - 公布日： 2021-04-20 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种NK培养基及其扩增培养方法，包括NK细胞培养基；所述培养基包括无血清培养基、IL‑2、IL‑21、IL‑15和人自体血清。本发明不需要使用胎牛血清，可以避免使用外源血清带来的风险；不需要使用流式细胞仪或免疫磁珠技术进行分选纯化；扩增效率高，9天就能获得较高纯度NK细胞,CD3－CD56+的比例大于50％,扩增倍数为121倍。
一种 nk 培养基及其扩增培养方法

[实用新型]一种低温细胞无菌灌装系统-CN201922262602.5有效
发明人：孙钰栋;吴立前 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2019-12-16 - 公布日： 2021-03-02 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种低温细胞无菌灌装系统，包括无菌隔离箱；设于所述无菌隔离箱内的细胞灌装设备，用于灌装细胞；降温设备，用于向所述无菌隔离箱内输送低温空气以维持所述无菌隔离箱内环境温度为1‑8℃；设于所述无菌隔离箱上的过滤装置，用于过滤输送至无菌隔离箱内的空气。本实用新型通过无菌隔离箱和降温设备，灌装时实现：灌装处于无菌状态，免除细胞被污染；灌装区内温度处于恒定低温，细胞活性高，可适应灌装物的种类多，适用范围广；灌装无需人工监控，降低工人劳动强度。
一种低温细胞无菌灌装系统

[实用新型]超大面积细胞培养系统-CN201922356165.3有效
发明人：孙钰栋;吴立前 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2019-12-24 - 公布日： 2021-02-19 - 主分类号： C12M3/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种超大面积细胞培养系统，包括培养箱、与所述培养箱一端相连的第一无菌隔离器、与所述培养箱另一端相连的第二无菌隔离器、多个用于盛放细胞的培养件及用于输送所述培养件由所述第一无菌隔离器输送至培养箱内的输送装置，所述输送装置设于所述培养箱上。本实用新型可以培养大数量的细胞，且对培养好细胞进行自动化的运输出去，其实现无间断，大数量的细胞培养，具有培养效率高，人工操作少，污染细胞的可能性低的优点。
超大面积细胞培养系统

[实用新型]一种细胞生产隔离器的送排放系统-CN201922497502.0有效
发明人：孙钰栋;吴立前 -专利权人： 杭州原生生物科技有限公司
申请日： 2019-12-31 - 公布日： 2020-11-24 - 主分类号： F24F5/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种细胞生产隔离器的送排放系统，包括空调装置、与所述空调装置相配合的送风总管、用于将所述送风总管中的风输送至隔离器内的送风支管、多个用于将隔离器内的部分风回送至的空调装置的回风部件，所述送风支管与所述送风总管相连通，且该送风支管上设有定风量阀。本实用新型通过在送风支管上安装定风量阀，送入至隔离器内的风量一定，保障隔离器环境中温度、湿度恒定，因此培养细胞的成功率高。
一种细胞生产隔离器排放系统

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