本发明涉及新冠病毒重组蛋白和人血管紧张素转换酶‑2重组蛋白及其制备方法和应用;新冠病毒S1‑NCTD重组蛋白具有的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,人血管紧张素转换酶‑2重组蛋白具有的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示;本发明还提供所述新冠病毒S1‑NCTD重组蛋白和人血管紧张素转换酶‑2重组蛋白在制备新冠病毒中和抗体的ELISA检测试剂盒上的应用。与现有技术相比,本发明利用基因工程技术在原核系统大肠杆菌中制备了该两种重组蛋白,均可以成功高效表达,且具有良好的抗原性,能很好地用以检测新冠病毒中和抗体,并在新冠疫苗接种后的免疫力评估中得到应用。相比较于其他传统方法更为安全高效,对于新冠病毒的基础研究以及临床检测具有积极意义。