本发明公开一种基于RNAi干扰核盘菌OAH基因的重组载体及其构建方法与应用,具体涉及到通过RNAi干扰技术干扰核盘菌中OAH基因的表达、克隆、草酸的合成与技术应用。本发明从核盘菌中分离克隆得到核盘菌关键致病蛋白OAH核苷酸序列,将其作为干涉片段,靶向沉默核盘菌OAH基因表达,该序列如SEQ ID NO:1所示。本发明对RNAi干扰核盘菌OAH基因的功能进行了验证。通过基因工程技术在沉默核盘菌OAH基因表达,影响草酸合成积累,使转基因油菜叶片及茎秆接种菌核病后病斑面积减少,提高转基因油菜对核盘菌的抗性,对增强甘蓝型油菜对菌核病抗性具有重要的应用前景。