本发明公开一种基于RPA检测猴痘病毒的引物组合和试剂盒,属于人兽共患病分子生物学检测技术领域。为了利用RPA技术开发出一种快速、灵敏度高、特异性强的检测猴痘病毒的实时荧光检测试剂盒和试纸条试剂盒。本发明提供了用于检测猴痘病毒的引物组合物核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示,以及与引物配合使用的探针如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示;利用实时荧光检测试剂盒或试纸条试剂盒可以在等温条件下,快速的检测样本中是否含有猴痘病毒,检测灵敏度可达100copies/μl。本发明具有操作简便、快速、高效和特异的优点,对输入性猴痘的筛查具有重要意义。