本发明公开一种多模块嵌合蛋白、生物蛋白纤维及其制备方法和应用。所述多模块嵌合蛋白由双嵌段蛋白模块及蛛丝末端CTD结构域构成;双嵌段蛋白模块由不同聚合度和/或不同比例的Resilin‑ELP和Spider‑ELP组成,其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1‑2所示,蛛丝末端CTD结构域为ADF3,氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。根据本发明方法制备出了多种不同聚合度的多模块嵌合蛋白,并且进一步通过湿法纺丝工艺将其制备成适用于不同溶剂环境的高力学性能生物蛋白纤维,所述生物蛋白纤维具有良好的细胞相容性,并可用于组织缝合,具有广阔的医学应用前景。