本发明涉及一种深海弹性蛋白酶的低成本制备方法,步骤如下:(1)将深海细菌接种于液体种子培养基,经培养,获得种子培养液;(2)将种子培养液接种于发酵培养基,经发酵培养后,离心取上清,制得发酵液;(3)将发酵液过夜透析,离心,经DEAE-Sepharose Fast Flow层析后经梯度洗脱,取第一个洗脱峰的洗脱液,制得深海细菌弹性蛋白酶。本发明用屠宰厂副产品牛心管代替弹性蛋白,进行细菌菌株CF6-2胞外弹性蛋白酶的产酶发酵,发酵成本降低70%以上,具有很好的环境效益和社会效益。
本发明涉及自主复制型表达载体pEV及其制备方法与应用。适冷宿主菌菌株SM20429的自主复制型表达载体pEV,核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;本发明还公开了上述自主复制型表达载体pEV的制备方法与应用。适冷宿主菌菌株SM20429和自主复制型表达载体pEV具有被发展成为大量表达外源蛋白的适冷表达系统的潜在价值,从而达到在低温条件下快速制备适冷蛋白的目的。
本发明涉及一种海洋适冷内切β-木聚糖酶及其表达基因xynB与应用,属于生物技术技术领域。一种海洋适冷内切β-木聚糖酶XynB,氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。以及编码上述海洋适冷内切β-木聚糖酶XynB的基因xynB,核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明所述的β-木聚糖酶XynB在0-35℃具有比较高的催化效率,应用于纸浆漂白,木寡糖生产,面粉改性等可在室温下进行,可以省去传统工艺的升温步骤,从而节约能源。
本发明涉及一种深海适冷耐盐胶原蛋白酶及其编码基因myr02与应用,属于生物技术领域。一种深海适冷耐盐胶原蛋白酶基因myr02,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。胶原蛋白酶基因myr02编码的胶原蛋白酶myr02,其氨基酸序列SEQ ID NO.12所示。本发明所述的胶原蛋白酶myr02可降解不溶性I型胶原蛋白,同时对明胶等可溶性底物也有较高活性,具有较好的适冷性和耐盐性。
一种从蓝藻中快速分离纯化C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白的方法,属于藻蓝蛋白分离纯化技术领域。本发明应用经冻溶和低离子强度溶涨快速提取C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白,然后经硫酸铵沉淀进行初步纯化,最后利用琼脂糖凝胶FF(DEAE Sepharose Fast Flow)离子交换层析技术,用恒定的离子强度、pH梯度的缓冲液进行洗脱,一步法可以得到高纯度的C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白。本方法操作简便,省时省力,对设备要求简单,得率高并且大大降低了CPC和APC的制备成本,从而为将CPC和APC应用于超灵敏的生物医学检测奠定了基础。