本发明涉及分子生物技术领域,具体公开了鉴定五叶草莓的KASP分子标记组及其应用,KASP标记组包括A07A2327328、A07G2331369和A07C2368466,引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.3所述的引物对、核苷酸序列如SEQ ID NO.4‑SEQ ID NO.6所示的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.7‑SEQ ID NO.9所示的引物对。本发明的KASP分子标记组及其引物对能够快速、稳定地筛选和鉴定五叶草莓种质资源,显著区分五叶草莓资源,有效加速遗传多样性和遗传结构分析。