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[发明专利]DPEase基因、基因表达模块及D-阿洛酮糖的制备方法-CN202310469935.3在审
发明人：元英进;杨庆华;姚明东;王颖 -专利权人：天津大学
申请日： 2023-04-27 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12N15/61 文献下载
摘要：本发明涉及生物工程领域，尤其涉及DPEase基因、基因表达模块及D‑阿洛酮糖的制备方法。本发明提供了DPEase基因，所述DPEase基因的来源包括：Agrobacterium sp.、C.cellulolyticum、F.plautii、Clostridium sp、Sin orhizobium sp.或Dorea sp.中的一种或多种。本发明旨在构建一株DPEase表达活性较高的酿酒酵母，能高效率的将D‑果糖转化为D‑阿洛酮糖。
dpease 基因表达模块阿洛酮糖制备方法

[发明专利]重组酿酒酵母菌株及其构建方法-CN202110467433.8有效
发明人：元英进;吴楠;杜现礼;王颖;姚明东;段小涛;肖文海 -专利权人：天津大学;中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
申请日： 2021-04-28 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N9/00 文献下载
摘要：本发明涉及合成生物学领域，具体涉及生产田麦角碱的重组酿酒酵母菌株(Saccharomyces cerevisiae)及其构建方法。该菌株命名为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)SyBE_Sc06130032，简称SyBE_Sc06130032。本发明还提供了在酿酒酵母中从头构建合成田麦角碱的方法，easA成功筛选到一个新的来源，克服了在关键分支点合成田麦角碱的难点，进一步解析了田麦角碱的合成路径，为麦角生物碱的异源合成奠定了基础。
重组酿酒酵母菌株及其构建方法

[发明专利]酿酒酵母工程菌及其构建方法与应用-CN202310159316.4在审
发明人：元英进;周魁;姚明东;肖文海;王颖;梁楠 -专利权人：天津大学
申请日： 2023-02-23 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N15/01 文献下载
摘要：本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及酿酒酵母工程菌及其构建方法与应用。本发明提供的保藏编号为CGMCC No.26221的酿酒酵母，是在底盘菌酿酒酵母SyBE_Sc14D18的基础上经过定点突变、常压室温等离子体诱变和过氧化氢诱导的适应性实验室进化后筛选获得的，又在该菌株的基础上提高香叶基焦磷酸合酶TmCrtE的表达以及恢复Ura3基因的表达获得了一株高产番茄红素的酿酒酵母工程菌。
酿酒酵母工程及其构建方法应用

[发明专利]生产7-脱氢胆固醇的重组酿酒酵母菌株及其构建方法-CN202110319820.7有效
发明人：元英进;郭晓静;王颖;肖文海;姚明东 -专利权人：天津大学
申请日： 2021-03-25 - 公布日： 2023-05-26 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及微生物代谢领域，特别涉及生产7‑脱氢胆固醇的酿酒酵母菌株及其构建方法。本发明公开了两种生产7‑脱氢胆固醇的重组酿酒酵母菌株(Saccharomyces cerevisiae)，其命名为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SyBE_Sc01250043和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SyBE_Sc01250045，简称SyBE_Sc01250043和SyBE_Sc01250045及其构建方法。本发明的重组酿酒酵母菌株相对于现有报道的菌株显著提高了7‑脱氢胆固醇的产量。
生产脱氢胆固醇重组酿酒酵母菌株及其构建方法

[发明专利]高产田麦角碱重组酵母构建方法与应用-CN202310208900.4在审
发明人：元英进;吴楠;杜现礼;王颖;姚明东;段小涛;肖文海 -专利权人：天津大学;中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
申请日： 2023-03-06 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12P17/18 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及高产田麦角碱重组酵母构建方法与应用。本发明通过确定生物合成田麦角碱异源途径酶(DmaW，EasF，EasE，EasC，EasD，EasA，EasG)在酿酒酵母菌株中的亚细胞表达场所来重构异源合成途径实现田麦角碱的产量优化。本发明确定了生物合成田麦角碱异源途径酶(DmaW，EasF，EasE，EasC，EasD，EasA，EasG)在酿酒酵母菌株中的亚细胞表达场以及表达水平，也进一步证明了该异源途径的引入会引起内源环境的辅因子不平衡，为后续继续优化提产田麦角碱提供了有利证据，也为以田麦角碱为前体生物合成麦角酸衍生物提供了一个高产底盘。
高产田麦角重组酵母构建方法应用

[发明专利]质粒载体及其在构建多拷贝表达系统中的应用-CN202110155734.7有效
发明人：元英进;曾薄轩;王颖;姚明东;肖文海 -专利权人：天津大学
申请日： 2021-02-04 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及质粒载体及其在构建多拷贝表达系统中的应用。本发明基于CRISPR/cas9基因编辑技术构建了质粒载体，从而能够在酿酒酵母内通过增加基因拷贝数来过表达目的基因。通过直接编辑酿酒酵母内源性2μ质粒，将目标基因直接插入到2μ质粒中，可使得目标基因可以多拷贝的形式在酿酒酵母内进行稳定的过表达。以二氢青蒿酸的表达为例，使用pE2μ多拷贝质粒系统的菌株SyBE_Sc01130584的产量达到620.9mg/L,而使用pC2μ质粒进行过表达仅仅产生131.0mg/L。
质粒载体及其构建拷贝表达系统中的应用

[发明专利]八氢番茄红素脱氢酶突变体及其应用-CN202010597043.8有效
发明人：元英进;梁楠;姚明东;肖文海;王颖 -专利权人：天津大学
申请日： 2020-06-28 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明涉及生物合成领域，特别涉及八氢番茄红素脱氢酶突变体及其应用。本发明基于前期通过易错PCR筛选到的BtCrtI突变体菌株，对所包含的突变位点进行单点和多点重组验证，确定影响BtCrtI催化特异性的关键位点；对筛选得到的BtCrtI关键位点进行饱和突变，来增加BtCrtI突变体功能的多样性；通过对BtCrtI单点饱和突变结果进行主成分分析(PCA)和K均值聚类分析，对单点突变体归类，并将不同类别的代表性的单点突变进行组合，进一步分析BtCrtI催化功能的多样性。
番茄脱氢酶突变体及其应用

[发明专利]网状路径产物定向合成-CN202211741254.X在审
发明人：元英进;张若思;王颖;肖文海;姚明东 -专利权人：天津大学
申请日： 2022-12-30 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及网状路径产物定向合成。与利用天然微生物内源路径转化甾体底物相比，本发明在酵母底盘下，利用重新构建人工异源网状路径，通过理性组合路径组分蛋白，可实现定向合成节点产物。通过组合表达不同催化特异性的路径组分同源蛋白，可实现路径转化效率的进一步提升。同时利用在微生物底盘下构建人工孕烯醇酮合成路径，并通过引入特定下游雄烯二酮合成路径组分，实现以简单碳源为底物，定向合成雄烯二酮路径节点化合物。
网状路径产物定向合成

[发明专利]一种体外合成藏红花酸的方法-CN202110523493.7有效
发明人：元英进;梁楠;肖文海;姚明东;王颖 -专利权人：天津大学
申请日： 2021-05-13 - 公布日： 2023-03-31 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明涉及酶催化合成技术领域，公开了一种体外合成藏红花酸的方法。本发明所述方法构建CsCCD2基因和SynALD基因的表达质粒，转入宿主细胞进行蛋白表达，获得CsCCD2蛋白和SynALD蛋白；然后在含有FeSO4、L‑抗坏血酸、TCEP、catalase和NAD+的缓冲液中加入底物玉米黄质和CsCCD2蛋白反应，至产物藏红花酸二醛不再增加；之后再向缓冲液中添加SynALD蛋白反应，至藏红花酸不再增加。本发明首次公开了体外玉米黄质到藏红花酸的反应过程，依据该反应过程通过优化体外合成条件，首次直接以玉米黄质为底物，通过先后两步酶催化，实现玉米黄质的高效转化，合成纯度较高的藏红花酸，弥补微生物合成的低效率缺陷。
一种体外合成藏红花方法

[发明专利]混菌避免路径竞争的模块及其应用-CN202211731558.8在审
发明人：元英进;张若思;王颖;肖文海;姚明东 -专利权人：天津大学
申请日： 2022-12-30 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C12N9/02 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及混菌避免路径竞争的模块及其应用。本发明通过混菌共培养策略，利用简单碳源为底物，实现多基因、长路径、复杂网状路径的甾体化合物的从头合成。利用网状路径线性化策略，实现路径简化、并回避不想要的中间反应/竞争反应。氮源限制培养策略中，培养基的氮源浓度较低，减少了发酵过程中氮源投料量，使发酵更为经济。在共培养体系中，通过简便易行地改变几种菌株的初始接菌比例，对发酵过程中菌群比例进行调整。由于不同菌群所含路径元件不同，因此可以实现通过调整初始接菌比例，对路径元件表达强度进行调整。
避免路径竞争模块及其应用

[发明专利]一种生产二氢青蒿酸的酿酒酵母工程菌及其构建方法和应用-CN202110708305.8有效
发明人：元英进;曾薄轩;肖文海;姚明东;王颖 -专利权人：天津大学
申请日： 2019-11-06 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及微生物技术领域，公开了一种生产二氢青蒿酸的酿酒酵母工程菌。本发明所述工程菌在通过二氢青蒿酸酿酒酵母异源合成途径改造的酿酒酵母基础上，使其原有表达ALDH1的序列为表达突变的ALDH1H194R或ALDH1V247F的序列。本发明对路径的关键基因ALDH1进行定点突变以获得选择性更好的基因，使代谢路径更偏好二氢青蒿酸的合成，降低青蒿酸所占比例。两个突变体ALDH1H194R和ALDH1V247F在本发明中证明可提高二氢青蒿酸/青蒿酸的比例。在此基础上，将DBR2和ADH1融合表达，同时将突变ALDH1与DBR2融合表达可进一步提高二氢青蒿酸/青蒿酸比例且不牺牲二氢青蒿酸的产量。
一种生产青蒿酿酒酵母工程及其构建方法应用

[发明专利]一种快速筛选藏红花酸高产菌株的方法及其构建方法-CN202110516129.8有效
发明人：元英进;梁楠;肖文海;姚明东;王颖 -专利权人：天津大学
申请日： 2021-05-12 - 公布日： 2022-10-25 - 主分类号： C12N1/18 文献下载
摘要：本发明涉及微生物技术领域，公开了一种快速筛选藏红花酸高产菌株的方法及其构建方法。本发明所述方法将待筛选菌株采用两相发酵法发酵培养，其中发酵培养基的体积不高于有机相的体积；发酵完成后，测定有机相吸光度，吸光度越高则表示藏红花酸产量越高，通过吸光度高低快速筛选出藏红花酸高产菌株。本发明发现了优化两相发酵中有机相的比例，从而可以使得菌株细胞内的藏红花酸完全排到胞外有机相中，而前体类胡萝卜素底物无外排，从而可通过有机相的吸光度变化判断菌株藏红花酸产量的变化，而不必使用复杂的HPLC法，能够实现快速简便的筛选高产藏红花酸菌株。
一种快速筛选藏红花高产菌株方法及其构建

[发明专利]一种高产香茅醇的酵母基因工程菌株及其构建方法和发酵方法-CN202011352643.4有效
发明人：元英进;姜国珍;肖文海;姚明东;王颖 -专利权人：天津大学
申请日： 2020-11-26 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及酿酵母菌株构建及发酵技术领域，特别涉及一种高产香茅醇的酵母基因工程菌株及其构建方法和发酵方法。该酵母基因工程菌株的改造包括：转入CrIS、NmIS2、OeIS、OYE2、OYE3基因中的一种或几种；将酵母底盘菌株的ERG20突变为ERG20F96W；在表达异构酶IDI1、还原酶CrIS和融合蛋白GE的同时，引入由SH3、PDZ、GBD组成的蛋白支架，组装成蛋白复合体。本发明的重组酿酒酵母菌株相对于现有技术更为环保、成本低廉，为香茅醇的生产提供了一种绿色高效的方法。
一种高产香茅酵母基因工程菌株及其构建方法发酵

[发明专利]一种生产二氢青蒿酸的酿酒酵母工程菌及其构建方法和应用-CN201911075759.5有效
发明人：元英进;曾薄轩;肖文海;姚明东;王颖 -专利权人：天津大学
申请日： 2019-11-06 - 公布日： 2021-08-24 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及微生物技术领域，公开了一种生产二氢青蒿酸的酿酒酵母工程菌。本发明所述工程菌在通过二氢青蒿酸酿酒酵母异源合成途径改造的酿酒酵母基础上，使其原有表达ALDH1的序列为表达突变的ALDH1H194R或ALDH1V247F的序列。本发明对路径的关键基因ALDH1进行定点突变以获得选择性更好的基因，使代谢路径更偏好二氢青蒿酸的合成，降低青蒿酸所占比例。两个突变体ALDH1H194R和ALDH1V247F在本发明中证明可提高二氢青蒿酸/青蒿酸的比例。在此基础上，将DBR2和ADH1融合表达，同时将突变ALDH1与DBR2融合表达可进一步提高二氢青蒿酸/青蒿酸比例且不牺牲二氢青蒿酸的产量。
一种生产青蒿酿酒酵母工程及其构建方法应用

[发明专利]一种高产藏红花酸的酿酒酵母及其构建方法和应用-CN202110516673.2在审
发明人：元英进;梁楠;肖文海;姚明东;王颖 -专利权人：天津大学
申请日： 2021-05-12 - 公布日： 2021-08-13 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及微生物技术领域，公开了一种高产藏红花酸的酿酒酵母及其构建方法和应用。本发明所述酿酒酵母染色体整合有CCD2和ALD两个蛋白酶的编码基因，或该酿酒酵母中转化有表达CCD2和ALD两个蛋白酶的载体；同时，所述CCD2蛋白酶编码基因的N段融合有HIS标签。本发明在CsCCD2基因的N端融合6x His标签改善CsCCD2在酵母内的可溶性表达，进而提高藏红花酸产量，相比较未融合6x His标签的对照菌株产量提高了36％。
一种高产藏红花酿酒酵母及其构建方法应用

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