本发明公开了一种两个定点敲除水稻基因OsZFP8的sgRNA的oligo DNA组及其应用，基因编辑OsZFP8的两个sgRNA核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，通过构建Crispr Cas9基因编辑载体利用农杆菌介导法转化水稻愈伤组织，筛选鉴定获取阳性转基因植株，实现对水稻OsZFP8基因的敲除。利用Crispr Cas9基因编辑系统获取的两种不同突变方式的突变体稻米均出现垩白粒率显著增高，稻米胚乳呈不透明状。通过转基因方法将野生型正常有功能的OsZFP8基因CDS序列导入突变体中，可使突变体稻米胚乳恢复到野生型透明表型。利用本发明制备的sgRNA可高效、快速、精确靶向编辑水稻OsZFP8基因，在基础研究(水稻胚乳发育与稻米品质分子机理)和生产实践(水稻品质改良)上具有一定的意义。
本发明提供一种敲除水稻OsPLS4基因的sgRNA。针对水稻OsPLS4基因设计基于CRISPR/Cas9的sgRNA序列，将含有编码所述sgRNA序列的DNA片段连接到携带CRISPR/Cas9的载体中，用农杆菌介导的方法转化水稻愈伤组织，通过筛选鉴定，实现对水稻OsPLS4基因的敲除。其中，sgRNA作用位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过CRISPR‑CAS9技术对水稻内源基因OsPLS4进行编辑，获得了OsPLS4敲除突变体。利用本发明制备的sgRNA能高效、快速、精确靶向水稻OsPLS4基因，在基础研究(水稻早衰分子机理)和生产实践(水稻早衰品种改良和抗逆育种)上具有一定的意义。
本发明提供一种靶向敲除水稻OsAurora1基因的sgRNA。针对水稻OsAurora1(LOC_Os01g09580)基因的编码区序列，设计基于CRISPR/Cas9技术的sgRNA序列，将含有编码该sgRNA序列的DNA片段插入到携带CRISPR/Cas9的载体中，转化水稻，实现对水稻OsAurora1基因组序列的编辑与该基因的敲除。其中，sgRNA作用位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过CRISPR‑CAS9技术对水稻内源基因OsAurora1进行编辑，获得了OsAurora1敲除水稻植株。利用本发明制备的sgRNA能高效、快速、精确靶向水稻OsAurora1基因，在水稻细胞生物学基础研究和水稻育种生产实践上具有一定的意义。
本发明提供一种敲除水稻OsAUR2基因的sgRNA的oligo DNA组。针对水稻OsAUR2基因设计基于CRISPR/Cas9的sgRNA序列，将含有编码所述sgRNA序列的DNA片段连接到携带CRISPR/Cas9的载体中，转化水稻，实现对水稻OsAUR2基因的敲除。其中，sgRNA作用位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过CRISPR‑CAS9技术对水稻内源基因OsAUR2进行编辑，获得了OsAUR2敲除突变体。利用本发明制备的sgRNA能高效、快速、精确靶向水稻OsAUR2基因，在基础研究(水稻有丝分裂)和生产实践(水稻高产育种和抗逆育种)上具有一定的意义。
本发明公开了一种水稻蜡质合成相关的蛋白质及其编码基因WSL5与其在水稻育种中的应用。本发明提供了一种水稻蜡质合成相关的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明还提供了一种编码权利上述蛋白质的基因WSL5，所述基因WSL5的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。上述基因WSL5在在改良水稻蜡质含量以及水稻抗生物和非生物胁迫中的应用。本发明分离并克隆鉴定了控制水稻蜡质合成基因WSL5，并通过互补实验进行基因功能验证。图位克隆的结果表明，该基因编码了一个氧化还原酶。本发明为培育蜡质含量丰富、抗胁迫的新品种，对于解决目前水稻品种易出现后期早衰、生产受环境影响等问题具有广阔的应用前景。
