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[发明专利]一种通过注射Podocan蛋白促进小鼠骨骼肌损伤再生的方法-CN202310776020.7在审
发明人：李爽;滕怀昕;李树峰;严云勤;佟慧丽;任鹏 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2023-06-28 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： A61K38/17 文献下载
摘要：一种通过注射Podocan蛋白促进小鼠骨骼肌损伤再生的方法，属于细胞生物学技术领域，主要包括三个方面的内容：首先是Podocan表达载体的构建，其次是Podocan表达载体的转染、Podocan蛋白纯化及鉴定，第三是注射Podocan蛋白对小鼠骨骼肌损伤再生影响的检测，其特征在于：所述的Podocan表达载体的核苷酸序列如Seq ID No:1所示，Podocan蛋白注射可以在肌纤维中有效表达，表达Podocan可以促进小鼠骨骼肌损伤再生。本发明制作简单，可操作性强，成本低廉，效果明显。
一种通过注射 podocan 蛋白促进小鼠骨骼肌损伤再生方法

[发明专利]通过外源添加能显著促进小鼠C2C12成肌细胞分化的促分化试剂YYQ1-CN202010218745.0在审
发明人： 严云勤;张闻宇;佟慧丽;李树峰 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2020-03-25 - 公布日： 2020-07-03 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：通过外源添加能显著促进小鼠C2C12成肌细胞分化的促分化试剂YYQ1，属于细胞生物学技术领域，其特征在于：所述的促分化试剂YYQ1的成分为10μM的视黄醇，通过将促分化试剂YYQ1添加于体外培养的C2C12细胞，能够获得较好的分化效率，促进C2C12细胞分化，最终达到外源添加后能显著促进小鼠C2C12成肌细胞的分化的目的，促分化试剂YYQ1为促进动物肌肉分化提供依据，以视黄醇促进肌肉分化，具有较大的实际应用价值。本发明制作简单，可操作性强，成本低廉，效果明显。
通过添加显著促进小鼠 c2c12 细胞分化试剂 yyq1

[发明专利]利用Crispr/Cas9技术制备MyoG基因敲入和MSTN基因敲除的细胞克隆-CN201910531285.4在审
发明人：李树峰;佟慧丽;严云勤 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2019-06-19 - 公布日： 2019-09-20 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：利用Crispr/Cas9技术制备MyoG基因敲入和MSTN基因敲除的细胞克隆，属于基因工程技术领域，其特征在于：细胞克隆被分离纯化且经过2％马血清诱导分化后可以形成肌纤维；该骨骼肌卫星细胞具有融合为肌管的能力；MSTN基因敲除载体靶位点已成功连接，未发生碱基突变；实验组细胞经分化能够形成一定数目的肌管，表明干扰MyoG基因后，细胞依然能够分化成为肌管，但总体肌管融合率降低，形态和数目较对照组有极显著差异。
肌管细胞克隆敲除制备骨骼肌卫星细胞基因工程技术分化实验组细胞分离纯化碱基突变显著差异诱导分化靶位点肌纤维马血清融合细胞成功

[发明专利]miR‑2400显著促进牛骨骼肌卫星细胞增殖的生物功能-CN201510292005.0有效
发明人： 严云勤;张伟伟;佟慧丽;李树峰 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2015-06-01 - 公布日： 2017-09-19 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：miR‑2400显著促进牛骨骼肌卫星细胞增殖的生物功能，属于细胞生物学技术领域，其特征在于通过对牛骨骼肌卫星细胞进行体外分离培养，采用含2％马血清的分化培养基诱导牛骨骼肌卫星细胞分化，在诱导分化3天后，荧光显微镜下观察到MHC和Desmin在牛骨骼肌卫星细胞中的表达情况；采用茎环荧光定量RT‑PCR检测miR‑2400的表达量，采用EdU、PCNA免疫荧光、CCK‑8以及CCND2和CDK6表达量的荧光定量RT‑PCR检测miR‑2400对骨骼肌卫星细胞增殖的影响；以上结果表明miR‑2400在调节牛骨骼肌卫星细胞增殖和分化过程中具有一定的作用，能够显著促进牛骨骼肌卫星细胞增殖。
mir 2400 显著促进骨骼肌卫星细胞增殖生物功能

[发明专利]具有显著促进牛前脂肪细胞增殖生物功能的miRNA-2400-CN201510334716.X在审
发明人： 严云勤;佟慧丽;李树峰;魏瑶;张伟伟 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2015-06-17 - 公布日： 2015-08-26 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：具有显著促进牛前脂肪细胞增殖生物功能的miRNA-2400，属于细胞生物学技术领域，通过对牛前脂肪细胞进行体外分离培养，采用免疫荧光染色法鉴定牛脂肪前体细胞，采用茎环荧光定量RT-PCR检测miRNA-2400的表达量，采用EdU检测miRNA-2400对前脂肪细胞增殖的影响；其特征在于在牛前脂肪细胞分化为脂肪细胞的过程中，随着分化天数和分化程度的增加，miRNA-2400表达量明显下降；miRNA-2400过表达后，前脂肪细胞增殖率明显提高，与增殖相关的基因CCND1表达量明显上升；结果表明：miRNA-2400是一种在调解脂肪细胞发育过程中具有显著促进前脂肪细胞增殖作用的小RNA。
具有显著促进脂肪细胞增殖生物功能 mirna 2400

[发明专利]一个牛α-actin基因的启动子及其应用-CN201510063159.2在审
发明人： 严云勤;佟慧丽;李树峰;胡倩;赵丹丹;李光鹏;张伟伟 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2015-01-29 - 公布日： 2015-05-27 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：一个牛α-actin基因的启动子及其应用，属于遗传工程技术领域，其特征在于牛α-actin基因262bp启动子片段内部一段含有3个SRE正调控元件的170bp的核酸序列，将其使用不同引物进行PCR扩增，得到2个170bp的核酸序列，将2个170bp的核酸序列串联于262bp启动子片段的上游，即170bp-170bp-262bp，构建成一个α-actin基因的启动子片段，其核苷酸序列如Seq ID No：1所示。该启动子具有较强的启动活性和骨胳肌特异性，同时，在牛骨胳肌卫星细胞中能够显著提高α-actin基因的表达活性，可以作为高效特异性的骨骼肌启动子应用于提高肌肉产量的转基因肉牛生产。
一个 actin 基因启动子及其应用

[发明专利]一种提高肌细胞生成素（MyoG）基因启动子活性的方法-CN201310113028.1无效
发明人：李树峰;佟慧丽;严云勤;金慧然;王鑫;李光鹏 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2013-04-02 - 公布日： 2013-07-10 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：一种提高肌细胞生成素（MyoG）基因启动子活性的方法，属于遗传工程技术领域，其特征在于通过克隆MyoG基因5′端调控区长度为2125bp的核酸序列，采用启动子缺失片段活性分析的方法获得1个长度为373bp，且具有较高肌肉特异性启动子活性的缺失片段即pGL3-MyoGpro373，又对其内部具有SP1正调控作用的启动子元件进行克隆，并将这两个片段进行串联，从而构建了一个含有两个拷贝数启动子调控元件的表达载体，称为pGL3-MyoGpro373-double，即具有“double”特征的启动子序列，其碱基组成Seq ID No:2所示。
一种提高细胞生成 myog 基因启动子活性方法

[发明专利]一种肌细胞生成素（MyoG）基因的增强子-CN201310113027.7无效
发明人：佟慧丽;李树峰;严云勤;金慧然;王鑫;李光鹏 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2013-04-02 - 公布日： 2013-06-19 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：一种肌细胞生成素（MyoG）基因的增强子，属于遗传工程技术领域，由调控元件E-box、SRE、KLF3、E-box、Sp1、E-box、Sp1、TEF-1组成，其特征在于MyoG基因增强子调控元件顺序为：E-box、SRE、KLF3、E-box、Sp1、E-box、Sp1、TEF-1；MyoG基因增强子“SE”的核酸序列如SeqIDNo:1所示，长度为147bp。在成肌细胞增殖和分化阶段均能促进MyoG基因表达的人工合成的增强子序列，且能够显著提高MyoG基因的表达活性。
一种细胞生成 myog 基因增强

[发明专利]转基因细胞培养装置-CN201310106352.0无效
发明人： 严云勤;佟慧丽;李树峰;金慧然;李光鹏 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2013-03-29 - 公布日： 2013-06-12 - 主分类号： C12M3/00 文献下载
摘要：转基因细胞培养装置，属于医疗和实验室设备技术领域，由瓶盖、瓶口、瓶头、瓶颈、瓶上面、瓶下面、瓶体、瓶腔、支撑柱、生长板、透液板、液盒上腔、生长板插孔、液盒、瓶底、瓶侧壁、透液板体、板间支撑、支撑轴、生长板卡槽、托层立壁、托层、吸液层、生长透液贴壁层、透液孔、支撑轴孔、挑拣装置组成，其特征在于：生长板由托层立壁、生长透液贴壁层、吸液层、托层、透液孔、支撑轴孔组成，生长透液贴壁层是一层纤维膜，上面有很多透液孔，以利接种在膜外表面上细胞的生长；吸液层可以吸附培养液；托层塑料前缘和两侧缘向上折起，形成托层立壁，以免培养液向外渗出。转基因细胞培养装置制作简单，功能多样，可操作性强，成本低廉，效果明显。
转基因细胞培养装置

[实用新型]胚胎移植器械袋-CN201120544178.4有效
发明人：周佳勃;岳顺利;佟慧丽;严云勤;于思淼;张利 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2011-12-15 - 公布日： 2012-11-21 - 主分类号： A61D19/04 文献下载
摘要：本实用新型公开一种胚胎移植器械袋，由外包装袋、软管、套管、微量移液器接头组成。外包装袋为双层塑料袋，当消毒好的胚胎移植器械装入后，可以将胚胎移植器械密封于袋中。套管是用于扩张动物阴道外口，软管用于将胚胎放入受体动物的子宫腔。微量移液器接头可使软管和微量移液器连接。本实用新型可以快速的进行动物的胚胎移植，克服手术法胚胎移植需要动物麻醉，止痛和术后护理等繁琐程序的困难以及效果不稳定等缺点，突出特点是容易操作，耗时少，对动物生殖道损伤极小，普通人员即可实施胚胎移植、费用低廉，能够为实验室动物胚胎移植，制作疾病研究和生物医药研究所需“模式动物”提供保障。
胚胎移植器械

[实用新型]绿色荧光蛋白转基因牛成纤维细胞株制备试剂盒-CN201120540087.3有效
发明人：佟慧丽;周佳勃;岳顺利;李树峰;严云勤;金鑫;李光鹏;金慧然;宋任举 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2011-12-13 - 公布日： 2012-10-17 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：绿色荧光蛋白转基因牛成纤维细胞株制备试剂盒由外包装盒、试剂瓶和无菌装置三部分组成，属于细胞生物学技术领域。外包装盒包括盒盖，与其相连的盒体，以及盒体内左侧安放的7个试剂瓶，试剂瓶带有瓶盖。同时包括盒体内右侧放置的一个长方体的，具有独立盒盖的集细胞培养、质粒转染及筛选功能为一体的无菌装置。其布局为：上部具有1个直径200毫米、深20毫米垂直排列的细胞培养孔，中间分布4个直径5毫米、深20毫米垂直排列的锥形储液小孔，下部具有4个直径30毫米、深20毫米的细胞培养孔。本实用新型试剂盒结构紧凑、携带方便、操作简单、重复性好，省时省力，能够很好的满足科学工作需要。
绿色荧光蛋白转基因纤维细胞株制备试剂盒

[实用新型]动物胚胎运输箱-CN201120576105.3有效
发明人：周佳勃;岳顺利;佟慧丽;严云勤;张利;于思淼 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2011-12-09 - 公布日： 2012-09-05 - 主分类号： B65D85/50 文献下载
摘要：动物胚胎运输箱，由外箱体、外箱盖子、内箱体、内箱盖子、生物冷热胶体袋、挎带和固定带组成，属于动物胚胎运输工具技术领域。所述的生物冷热胶体袋具有6个，并分布于长方体形内箱的六个面外，上下、前后、左右相对应面外的生物冷热胶体袋形状相同，大小相等。外箱体和外箱盖子组成外箱，内箱体和内箱盖子组成内箱，其特征在于：动物胚胎运输箱由泡沫材料制成的外箱和内箱构成双层结构，依靠内、外箱之间的空间所存放的生物冷热胶体袋来维持内箱中动物胚胎的温度，能够让动物胚胎保温10～12个小时。故适于运输时间小于或者等于10～12个小时的常温动物胚胎的运输，在满足日常运输动物胚胎的需求的同时还能降低运输成本。
动物胚胎运输

[实用新型]一种污水生物处理装置-CN201120091484.7无效
发明人：李树峰;佟慧丽;刘华晶;严云勤 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2011-03-31 - 公布日： 2011-08-31 - 主分类号： C02F3/12 文献下载
摘要：一种污水生物处理装置，它涉及一种污水处理装置，以解决现有污水处理装置的反应槽中净水腔的侧壁与底面为直角，该直角处容易使活性污泥堆积，导致活性污泥处理效率低的问题。出水口低于进水口，短隔板和长隔板由反应槽的进水口至出水口依次且垂直于反应槽的底面设置，短隔板和长隔板将反应槽的内腔隔为曝气腔、反应腔和净水腔，短隔板的上端面低于上水面，短隔板的下端面与反应槽内腔底面之间的距离小于长隔板的下端面与反应槽内腔底面之间的距离，长隔板的上端面高出反应槽的上端面，圆筒设置在反应腔中，圆筒的侧壁上设有数个小孔，曝气腔对应的反应槽的底面设有曝气孔，出水口所在的侧壁与反应槽的底面之间为斜面。本实用新型用于污水处理。
一种污水生物处理装置

[发明专利]牛肌卫星细胞的体外分离培养及诱导分化的方法-CN201010231364.2无效
发明人： 严云勤;佟慧丽;李树峰;兴孝友;高学军;陆黎敏;李光鹏;金慧然 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2010-07-20 - 公布日： 2010-11-17 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：牛肌卫星细胞的体外分离培养及诱导分化的方法，它涉及细胞的体外分离培养及诱导分化的方法。它解决了现有牛肌卫星细胞的分离培养存在成本高，传代稳定性不好，且诱导分化存在所获肌管数量少及不具有收缩功能的问题。方法：清洗组织，用胰蛋白酶和胶原酶液消化；过滤后离心，重悬细胞，接种后用差速贴壁法培养细胞；培养至汇合率为95%，用胰酶进行传代即完成。方法：获得PEI-质粒复合物；牛肌卫星细胞培养至汇合率为75%，清洗后加DMEM高糖培养液，将PEI-质粒复合物加到细胞表面，更换培养液A培养，再更换培养B诱导分化即完成。本发明牛肌卫星细胞的分离培养成本低，传代稳定性好，诱导分化所获肌管数量大且具有收缩功能。
卫星细胞体外分离培养诱导分化方法

[发明专利]乳酸菌混菌发酵结合酶解法生产蛋白饲料源小肽工艺-CN200910072989.6无效
发明人：高学军;黄建国;严云勤;陈超;佟慧丽;王娜 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2009-09-28 - 公布日： 2010-03-17 - 主分类号： A23K1/14 文献下载
摘要：本发明提供一种利用微生物发酵和酶解复合技术，采用常用蛋白饲料的乳酸菌混菌发酵结合酶解法生产蛋白饲料源小肽工艺。工艺流程：选择新鲜优质的豆粕、玉米蛋白粉、麦麸，使用粉碎机粉碎后过40目的筛子，称量后按比例进行混匀，称取一定量混合物，按5％蛋白质浓度与50℃去离子水混合，搅拌均匀，应用饱和Ca(OH)₂调节pH为7.7，经封装置于55℃空气浴振荡器中，频率100r/min，萃取反应60min；利用微生物发酵和酶解复合技术采用常用蛋白饲料制得的小肽无苦味和异味，口感好，生产成本大大降低，小肽得率占蛋白质含量65％，蛋氨酸2.51％，提高1.67％，赖氨酸5.17％，提高1.76％，为其他蛋白饲料资源生产饲用小肽提供了有效的资料和数据。
乳酸菌发酵结合解法生产蛋白饲料源小肽工艺

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