本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种载体骨架、基于该载体骨架和东方肉座菌低背景工程菌株的定位表达系统及应用。其中，载体骨架基因序列如SEQ ID NO.1所示，包括东方肉座菌△xyr1‑3的天冬氨酸蛋白水解酶上下游同源臂、抗性标记基因表达盒和目的基因表达盒插入的酶切位点，方便不同基因的表达和突变研究，如蛋白酶在该系统的表达和突变研究。本发明构建的基于载体骨架pUC‑ASPG和东方肉座菌胞外蛋白低背景工程菌株的定位表达系统，通过敲除xyr1基因后，菌株△xyr1‑3在诱导条件下基本不表达纤维素酶和半纤维素酶，消除了纤维素酶和半纤维素酶的本底表达，使东方肉座菌△xyr1‑3适合于纤维素酶、半纤维素酶及其它真菌分泌蛋白的表达和突变研究。
本发明涉及微生物技术领域，提供一株产纤维素酶的工程菌Oxa‑3及其应用、酶制剂及其制备方法，其中，一株产纤维素酶的工程菌Oxa‑3，其分类命名为里氏木霉，拉丁文学名为Trichoderma reesei，已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国武汉市武汉大学，邮编为430072，保藏编号为CCTCCNO：M2021845，保藏日期为2021年7月8日；该工程菌Oxa‑3是由xyr1‑hph‑ace3表达盒转化里氏木霉RUT C‑30的原生质体，通过酶活力筛选得到，所述xyr1‑hph‑ace3表达盒的基因序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的一株产纤维素酶的工程菌Oxa‑3具有高效的产纤维素酶特性，在5L发酵罐中补料发酵6天，发酵液FPA酶活力达到51.23FPU/ml，产酶效率为355.76FPU/h/L且发酵过程简单，周期短，可应用于纤维素酶工业化生产中，以降低生产成本。
