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[发明专利]连续应用亲和层析和陶瓷羟基磷灰石层析分离抗体药物的方法-CN201811194791.0在审
发明人：陆容;陈俏梅;王卓智;李竞;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2018-10-15 - 公布日： 2019-03-08 - 主分类号： C07K16/00 文献下载
摘要：本发明公开一种连续应用亲和层析和陶瓷羟基磷灰石层析分离抗体药物的方法，包括步骤：1)向经过亲和层析纯化之后的抗体溶液中加入磷酸钠缓冲盐至终浓度为5‑15mM，用Tris‑base调节抗体溶液的pH为6.7～6.9，用NaCl调节抗体溶液的电导率为5～7mS/cm；2)将步骤1)得到的抗体溶液采用陶瓷羟基磷灰石层析；陶瓷羟基磷灰石层析的步骤为：a、处理亲和填料，上样；b、使用淋洗2缓冲液淋洗柱层析；淋洗2缓冲液为体积分数10％的Buffer‑B；c、洗脱，先使用Buffer‑B梯度洗脱，再使用100％Buffer‑B洗脱。本发明的方法，可以连用亲和层析，进行两步纯化，简化了蛋白的纯化流程，降低了成本，极大的缩短时间；还具有分辨率高的特点，可将蛋白的纯度提高到90％以上。
陶瓷羟基磷灰石抗体溶液亲和层析层析层析分离抗体药物缓冲液淋洗洗脱蛋白磷酸钠缓冲盐亲和层析纯化电导率两步纯化亲和填料梯度洗脱体积分数分辨率淋洗柱再使用上样应用

[实用新型]连续单程切向流过滤系统-CN201820877343.X有效
发明人：唐思远;蒋俊俊;沈克强;林世文;周伟昌;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2018-06-07 - 公布日： 2019-03-01 - 主分类号： B01D61/00 文献下载
摘要：本实用新型公开一种连续单程切向流过滤系统，整合了三个泵、四个参数检测单元、十个隔膜阀和两个切向流过滤膜包，通过两个单程切向流过滤膜包构成两条流路分别用于交替上样和清洗，参数检测单元用于检测其所在管路中溶液的参数，系统在两种状态下切换，当其中一个切向流过滤膜包清洗的过程中另一个切向流过滤膜包仍连续不断地处理料液，并且能持续、稳定地运行，工作效率显著提高。
切向流过滤膜包单程参数检测单元清洗本实用新型处理料液工作效率连续不断隔膜阀流路上样整合检测

[发明专利]一种消除层析中洗脱肩峰的方法-CN201811143914.8在审
发明人：陈广勇;周茂志;王丹凤;孙李靖;罗明江;林世文;周伟昌;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2018-09-29 - 公布日： 2019-02-01 - 主分类号： C07K1/18 文献下载
摘要：本发明提供一种消除层析中洗脱肩峰的方法，是使用离子交换填料以结合洗脱的方式进行蛋白纯化，同时消除目的蛋白洗脱时UV检测出现的肩峰。其中，离子交换填料为Capto S ImpAct，该方法包括以下步骤：a)平衡：上样前用平衡缓冲液对离子交换填料进行平衡；b)上样：将蛋白样品加载至离子交换填料上，目的蛋白与离子交换填料结合；c)淋洗：用淋洗缓冲液淋洗离子交换填料；d)洗脱：用洗脱缓冲液将目的蛋白从填料上洗脱下来。本发明的方法通过利用差异化平衡缓冲液/淋洗缓冲液和洗脱缓冲液的pH值的方法达到了消除纯化蛋白过程中洗脱肩峰的效果。
离子交换填料洗脱肩峰淋洗目的蛋白平衡缓冲液洗脱缓冲液缓冲液消除层上样纯化蛋白蛋白纯化蛋白样品差异化加载平衡检测

[发明专利]一种通过离子交换层析提高唾液酸含量的方法-CN201810811417.4在审
发明人：陈广勇;张双健;安亚雄;孙李靖;罗明江;林世文;周伟昌;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2018-07-23 - 公布日： 2018-11-23 - 主分类号： C07K1/18 文献下载
摘要：本发明公开一种通过离子交换层析提高唾液酸含量的方法，是使用离子交换填料以结合洗脱的方式对目标蛋白进行纯化。离子交换填料为POROS 50HQ填料，采用低盐淋洗，去除部分低唾液酸含量蛋白。采用本发明提供的离子交换层析的方法，能够显著的提高目标蛋白中唾液酸的含量，有利于避免药物蛋白的很快降解，延长药物蛋白的半衰期。
唾液酸离子交换层析离子交换填料目标蛋白药物蛋白半衰期低盐降解淋洗去除洗脱蛋白

[发明专利]一种基于AKTA avant的缓冲液配制系统-CN201810549362.4在审
发明人：唐思远;沈克强;林世文;周伟昌;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2018-05-31 - 公布日： 2018-11-06 - 主分类号： B01F5/06 文献下载
摘要：本发明公开一种基于AKTA avant的缓冲液配制系统，包括AKTA avant层析设备一台，静态混匀管一个，单片机一个，AKTA I/O box模块一个，缓冲液储存瓶至少一个，液位开关至少一个；AKTA avant层析设备包括四元阀、A泵、B泵、A泵进口八通阀、B泵进口八通阀、样品泵进口八通阀、出口十二通阀、注射阀和混合池。本发明的缓冲液配制系统是基于实验室规模的蛋白层析纯化系统AKTA avant层析设备进行改进，可由本领域实验人员可以在实验室规模下实现，解决了实验室规模的连续流层析工艺中缓冲液体积过大、空间要求大的问题，解决了现有实验室设备只能支持固定的三种母液组分和水，在不同组分之间的比例相差很大时、混合效果不够充分，且不能实现自动控制的缺陷。
缓冲液配制层析设备八通阀泵进口实验室设备层析纯化层析工艺缓冲液体混合效果空间要求液位开关储存瓶单片机固定的缓冲液混合池样品泵注射阀混匀母液通阀蛋白进口出口改进

[发明专利]一种使唾液酸含量稳定的方法-CN201810479144.8在审
发明人：陈广勇;张双健;王丹凤;孙李靖;罗明江;林世文;周伟昌;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2018-05-18 - 公布日： 2018-10-16 - 主分类号： C07K1/00 文献下载
摘要：本发明公开一种使唾液酸含量稳定的方法，通过使用碱性试剂调节细胞培养澄清收获液的pH值≥8.0。本发明的方法能够使细胞培养澄清收获液中唾液酸含量在至少48h内保持稳定不变，可有效避免在下一产品捕获步骤的多个循环时间内唾液酸含量出现显著下降，有利于保持最终药物蛋白产品的较长的半衰期及活性。
唾液酸细胞培养含量稳定收获液澄清碱性试剂稳定不变药物蛋白半衰期捕获

[发明专利]利用单细胞PCR检测细胞遗传稳定性的方法-CN201810446767.5在审
发明人：董慧芳;徐嘉文;邱沛然;汤传龙;蔡洁行;周伟昌;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2018-05-11 - 公布日： 2018-10-02 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用单细胞PCR检测细胞遗传稳定性的方法，步骤包括：1)流式细胞进行单细胞分选及裂解；2)对裂解后的样品提取DNA进行预扩增；3)对预扩增产物进行qPCR；4)根据基因拷贝数的变化衡量细胞的遗传稳定性。本发明通过高通量地在单细胞水平检测基因拷贝数，实现了在微观水平上对基因拷贝数，细胞的异质性、遗传稳定性和均一性的快速准确测定，从而为药品研发过程中，细胞株的构建和筛选、医药蛋白的生产和质量控制奠定了坚实的基础。
基因拷贝数遗传稳定性细胞遗传裂解单细胞水平细胞扩增产物流式细胞微观水平样品提取药品研发均一性细胞株异质性预扩增质量控制分选高通构建蛋白筛选衡量检测生产

[发明专利]一种用于去除抗体蛋白中内毒素的方法-CN201810373141.6在审
发明人：席宏星;赵普亚;陈晓悦;蔡洁行;周伟昌;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2018-04-24 - 公布日： 2018-09-28 - 主分类号： C07K16/00 文献下载
摘要：本发明提供一种用于去除抗体蛋白内毒素的方法，是将待处理蛋白样品进行一步亲和层析，步骤如下：(1)用平衡液润洗亲和层析柱、消毒、再平衡、上样；所述平衡液是含有NaCl的磷酸盐缓冲液，其pH为7.2～7.4，电导率为16.0～18.0mS/cm；(2)用冲洗液冲洗层析柱，用平衡液冲洗层析柱；所述冲洗液是添加了Arg的平衡液；(3)用洗脱液洗脱，收集洗脱液；所述的洗脱液是醋酸钠缓冲溶液，其pH为3.3～3.5，电导率为0.24～0.44mS/cm。本发明可以在不改变抗体蛋白性质的条件下，有效的去除蛋白样品中的内毒素，并且过程中不影响蛋白的纯度，回收率高。本发明处理方法简单，成本低廉，耗时短，采用本方法处理后的样品内毒素含量小于0.1EU/mg，安全性好，临床应用前景良好。
内毒素平衡液抗体蛋白洗脱液去除电导率蛋白样品冲洗层冲洗液醋酸钠缓冲溶液磷酸盐缓冲液亲和层析柱临床应用亲和层析影响蛋白润洗上样洗脱回收率耗时消毒平衡

[发明专利]一种表达高甘露糖糖型的葡萄糖脑苷脂酶的细胞株及其制备方法和应用-CN201810324763.X在审
发明人：陈远;汪凤麟;蔡洁行;周伟昌;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2018-04-11 - 公布日： 2018-09-28 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：本发明公开一种表达高甘露糖糖型的葡萄糖脑苷脂酶的细胞株的制备方法，包括以下步骤：(1)脂质体转染：针对GNT1基因的序列，设计引导核酸内切酶切割的sgRNA序列；将所述sgRNA序列重组至敲除载体中，得到sgRNA和核酸内切酶共表达的合成质粒；通过脂质体转染方法将合成质粒转染稳定表达葡萄糖脑苷脂酶的细胞池；(2)有限稀释法克隆：筛选出单克隆细胞进行扩大培养；(3)目的基因突变克隆筛选：通过细胞PCR测序获得GNT1基因敲除单克隆，即得到一种表达高甘露糖糖型的葡萄糖脑苷脂酶的细胞株。该细胞株不仅能稳定表达葡萄糖脑苷脂酶，并且甘露糖糖型含量显著提高，可有效提高其与甘露糖受体结合能力，提高其酶活能力，达到增加药效目的。
葡萄糖脑苷脂酶细胞株高甘露糖核酸内切酶脂质体转染稳定表达合成制备方法和应用单克隆细胞甘露糖受体基因敲除结合能力克隆筛选扩大培养目的基因序列重组质粒转染甘露糖共表达稀释法细胞池酶活敲除质粒制备突变切割克隆筛选细胞基因

[发明专利]连续单程切向流过滤系统及方法-CN201810580510.9在审
发明人：唐思远;蒋俊俊;沈克强;林世文;周伟昌;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2018-06-07 - 公布日： 2018-08-24 - 主分类号： B01D61/00 文献下载
摘要：本发明公开一种连续单程切向流过滤系统，整合了三个泵、四个参数检测单元、十个隔膜阀和两个切向流过滤膜包，构成两条流路，通过两个单程切向流过滤膜包构成两条流路分别用于交替上样和清洗，系统在两种状态下切换，在其中一个切向流过滤膜包清洗的过程中另一个切向流过滤膜包仍连续不断地处理料液，并且能持续、稳定地运行，工作效率显著提高。本发明还提供一种连续进行单程切向流过滤的方法。
切向流过滤膜包单程流路清洗参数检测单元处理料液工作效率连续不断隔膜阀上样整合

[实用新型]用于高通量亲和纯化和制备的载架和自动化工作站-CN201721522418.4有效
发明人：李兴晨;王卓智;李竞;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2017-11-15 - 公布日： 2018-08-07 - 主分类号： C07K1/22 文献下载
摘要：本实用新型公开一种用于高通量亲和纯化和制备的载架，具有长方体形的本体；本体的上表面具有呈竖直方向设置的4‑12个负载孔，负载孔的上端为开口端，底部为封闭的；负载孔可供40mL及以上规格的离心管插入；4‑12个负载孔沿本体的长度方向依次排列呈一行，每相邻两个负载孔之间的间距相等。本实用新型还公开安装有该载架的用于高通量亲和纯化和制备的自动工作站。本实用新型的载架能够负载40mL以上体积的样品，满足大量样品的进样和分离纯化，可实现样品的制备。本实用新型的可以实现高通量的亲和纯化和制备。在实际使用中，将该载架用于自动化工作站，能够实现24小时内纯化32个40mL样品，稳定性好，显著提高了纯化效率，实现了样品的制备。
制备载架本实用新型亲和纯化高通量工作站自动化自动工作站长方体形方向设置分离纯化间距相等依次排列上端开口端离心管上表面进样孔沿竖直封闭

[发明专利]亲和层析填料动态载量测定方法-CN201610070333.0有效
发明人：晏明慧;蒋俊俊;唐思远;沈克强;周伟昌;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2016-02-01 - 公布日： 2018-07-31 - 主分类号： G01N21/47 文献下载
摘要：本发明公开了一种亲和层析填料动态载量测定方法，步骤包括：1)用流穿液配制不同浓度纯化蛋白样品；2)制备装填填料的过滤板；3)样品加到过滤板上并孵育；4)抽滤，收集流穿液并检测蛋白浓度，拟合吸附等温线；5)装填层析柱，上样，洗脱，记录紫外出峰的保留体积和电导出峰保留体积，短接层析柱，记录电导出峰保留体积，计算填料外排水孔隙率、全透过孔隙率及填料孔隙率；6)测定蛋白水合分子平均半径；7)计算动态载量。本发明结合亲和填料和单克隆抗体的性质特点，利用高通量筛选技术研究吸附等温线和吸附动力学模型，由单克隆抗体的静态载量预测亲和层析填料的动态载量，不仅耗时短，成本低，而且测定结果的准确性高。
亲和层析填料动态测定方法

[发明专利]低pH病毒灭活工艺中的纯化方法-CN201810010465.3在审
发明人：陈广勇;安亚雄;孙李靖;沈克强;周伟昌;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2018-01-05 - 公布日： 2018-05-22 - 主分类号： C07K1/36 文献下载
摘要：本发明公开一种低pH病毒灭活工艺中的纯化方法，包括步骤：1)低pH病毒灭活：使用酸性溶液将ProteinA亲和层析纯化后的洗脱蛋白溶液调节pH至3.6，所述酸性溶液为磷酸；2)中和：用碱性溶液中和低pH处理后的蛋白溶液，调节pH至5.5；3)过滤：静置至少0.5h后用0.2μm滤膜过滤。采用本发明的纯化方法可以在低pH病毒灭活工艺中显著降低HCP和ResDNA等杂质，纯化效果明显，大大减轻后续纯化工艺的压力。
ph 病毒工艺中的纯化方法

[发明专利]调节性T细胞体外扩增方法-CN201711305029.0在审
发明人：卢爽;郑勇;李竞;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司
申请日： 2017-12-11 - 公布日： 2018-05-22 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开一种调节性T细胞体外扩增方法，主要包括：分离，从血液样品中先分离出CD4+CD127low T细胞，再从CD4+CD127low T细胞中分离出CD4+CD25+CD127low Treg细胞；激活细胞，将分离出的CD4+CD25+CD127low Treg细胞悬浮于培养基RPMI1640+10％FBS中，加入3‑8倍细胞数量的CD3/CD28MACS磁珠，将细胞放于培养板中并加入500U/mL人重组IL‑2，培养；扩增与培养细胞，细胞中加入500U/ml人重组IL‑2，继续培养；然后将细胞传代，继续加入500U/ml人重组IL‑2培养；收集所有细胞，离心去除培养基，将细胞与细胞培养基加入到6孔板中培养2‑3天；之后再次离心，将细胞与细胞培养基加入到细胞培养瓶中进行培养，每2‑3天换液一次，从细胞激活开始总共培养14‑22天，收集所有细胞。本发明的方法能够有效促进调节性T细胞的增殖，并确保扩增后调节性T细胞的纯度和功能。
调节细胞体外扩增方法

[发明专利]一种利用流式细胞仪进行细胞单克隆化的方法-CN201711281781.6在审
发明人：张朗;张肖肖;董慧芳;蔡洁行;周伟昌;陈智胜 -专利权人：上海药明生物技术有限公司;无锡药明康德生物技术股份有限公司
申请日： 2017-12-07 - 公布日： 2018-05-15 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开一种利用流式细胞仪进行细胞单克隆化的方法，包括：步骤一、细胞分选：使用清洁后的流式细胞仪进行细胞分选，利用FSC和SSC的信号进行细胞粘连体去除，孔板中每孔分选1个目标细胞。步骤三、细胞培养：将分选后的目标细胞在二氧化碳培养箱静置培养，培养条件为36.5℃和5～6％CO2，培养5～15天，待克隆恢复。采用本发明的方法，单克隆率达到99.5％。
一种利用细胞进行单克隆方法