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[发明专利]一种杂交瘤细胞无血清高密度悬浮灌流培养工艺-CN201110377871.1有效
发明人：王彬;张征;张阳;屈颖;南刚;孙秀璇;徐力清;姚西英;王丽娟 -专利权人： 陈志南
申请日： 2011-11-24 - 公布日： 2012-03-28 - 主分类号： C12N5/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种杂交瘤细胞高密度灌流培养生产重组抗体蛋白的生产工艺，该工艺主要针对杂交瘤细胞代谢特征，筛选特定的培养成份进行灌流培养，在培养过程中充分补充代谢底物同时有效降低代谢副产物浓度，从而达到高效高产的目标。在过程控制方面，通过建立特异性灌流速率CSPR灌流培养计算模型，对培养参数进行实时计算，通过浓缩培养基分段流加，控制灌流速率，在补充葡萄糖及谷氨酰胺重要底物的同时，将副产物对培养的影响降低到最低。适用于杂交瘤细胞大规模培养制备生产用抗体蛋白，能够在较短时间内提供大量蛋白抗体，且规模小、投资低，能够在短时间内达到高效产出且批次差异低、可重复性高，能够达到抗体药物生产。
一种杂交瘤细胞血清高密度悬浮灌流培养工艺

[发明专利]抗H5N1型禽流感病毒的小羊驼VHH重链抗体及其制备方法和用途-CN201010148083.0有效
发明人：赵国屏;王颖;熊慧;严安;包文静;金维荣;陈志南;孙志伟;车小燕 -专利权人：上海人类基因组研究中心
申请日： 2010-04-15 - 公布日： 2011-10-19 - 主分类号： C07K16/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗H5N1型禽流感病毒的小羊驼VHH重链抗体，所述小羊驼VHH重链抗体选自SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列，所述的SEQ ID NO.1～SEQ IDNO：10所示的核苷酸序列分别编码具有SEQID NO.11～SEQ ID NO：20所示氨基酸序列的蛋白。此外，本发明还公开了上述抗H5N1型禽流感病毒的小羊驼VHH重链抗体的制备方法，该方法通过引物设计、PCR条件、连接和转化来保证抗体库的容量和多样性，构建了抗H5N1型禽流感小羊驼VHH型抗体库；然后通过优化的抗体库的固相筛选，从上述抗体库进行了噬菌体展示，并从中筛选出10个噬菌体展示抗体(具有SEQ ID NO：1～SEQ IDNO：10所示的核苷酸序列)。此外，本发明还公开了上述小羊驼VHH重链抗体在H5N1型禽流感病毒凝集素血凝抑制中的应用。
h5n1 禽流感病毒小羊 vhh 抗体及其制备方法用途

[发明专利]新城疫病毒Italien株辅助表达质粒系统和检测该系统的微型基因组及其应用-CN201010179881.X无效
发明人：边惠洁;尉丁;冯浩;南刚;陈志南 -专利权人： 陈志南
申请日： 2010-09-22 - 公布日： 2010-12-29 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明涉及基于不同转录启动子的新城疫病毒Italien株辅助表达质粒系统和检测该系统的微型基因组及其应用。本发明的有益效果是：得到分别采用真核转录启动子CMV启动子和T7启动子启动的两套NDV Italien株NP、P和L基因的辅助表达质粒系统，可以在真核细胞以及可以在表达T7RNA聚合酶的真核细胞中高效表达病毒蛋白。同时得到了携带不同标签蛋白的检测新城疫病毒Italien株辅助表达质粒系统的微型基因组，可以用来检测所构建的三种辅助蛋白表达质粒系统的功能，同时也可以用于病毒基因组功能以及重组病毒制备的研究。
新城疫病 italien 辅助表达质粒系统检测微型基因组及其应用

[发明专利]新城疫病毒Italien株HN蛋白和F蛋白及其在基因治疗药物中的应用-CN200910022455.2无效
发明人：边惠洁;陈志南;尉丁;冯浩 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2009-05-12 - 公布日： 2010-07-07 - 主分类号： C07K14/125 文献下载
摘要：本发明涉及一种新城疫病毒Italien株HN蛋白和F蛋白及其在基因治疗药物中的应用，包括NDV Italien株的HN基因和F基因的cDNA以及NDV Italien株的HN蛋白和F蛋白氨基酸序列。本发明的有益效果是：得到了可以单独或串联表达NDV Italien株HN和F基因的真核表达质粒或重组病毒颗粒，使这两种基因能够在真核细胞，包括人体的肿瘤细胞、转化细胞或异常细胞中同时表达其编码产物HN蛋白和F蛋白，并且这两种蛋白可以导致感染细胞与细胞之间融合形成多核巨细胞，最终产生细胞死亡的细胞毒效应。
新城疫病 italien hn 蛋白及其基因治疗药物中的应用

[实用新型]一种UUI型电感器件的磁路气隙介质-CN200920182682.7有效
发明人：黄思仲;林金城;陈志南;徐晓辉 -专利权人：清流县鑫磁线圈制品有限公司
申请日： 2009-08-25 - 公布日： 2010-05-19 - 主分类号： H01F27/24 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种主要应用于UUI型电感器件的气隙介质。本实用新型为一体化薄壁状结构，设有直臂，整体呈四边形片状一体化结构；也可在上述直臂两端分别设置折臂而形成“U”形一体化结构；将“U”形的本实用新型垫衬在UUI型电感器件的“U”形磁体的内侧面上，折臂的端面加工成与UUI型电感器件的I字形磁体的侧面相吻合的形状，“U”形磁体贴向I字形磁体形成闭合磁回路，由于折臂的端面高出“U”形磁体的外向端面而形成磁路气隙，折臂的端面与“U”形磁体的外向端面之间的距离即为磁路气隙量。本实用新型可降低采购成本和加工成本。
一种 uui 电感器件磁路介质

[发明专利]一种用于肿瘤病理诊断用途的免疫组织化学诊断试剂盒-CN200910022400.1有效
发明人：米力;陈小春;张阳;陈志南 -专利权人： 陈志南
申请日： 2009-05-07 - 公布日： 2009-12-09 - 主分类号： G01N33/577 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于肿瘤病理诊断用途的HAb18G/CD147癌标志物的免疫组织化学诊断试剂盒，包括：去除人组织切片中内源性酶的阻断剂；用于封闭人组织切片中交叉蛋白反应的封闭剂；与人体肿瘤组织中HAb18G/CD147癌标志物结合的第一抗体；能与第一抗体结合的生物素标记二抗；用来结合二抗的酶标亲和素，显色试剂，及磷酸盐缓冲系统等。该试剂盒具有特异性好、敏感性高、稳定、通用的特点，主要用于上皮源性恶性肿瘤(肝癌、肺癌、食管癌、胃癌、大肠癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌等)的病理诊断，有助于肿瘤的预警筛选、早期诊断、定性诊断、治疗反应及疗效监测、肿瘤的复发转移及预后判断。
一种用于肿瘤病理诊断用途免疫组织化学试剂盒

[发明专利]一种新型哺乳动物工程细胞亚群人胚肾293细胞HEK293ar-CN200910022368.7有效
发明人：马小魁;陈志南;李玲;李郁;汪莉;廖成功;张征 -专利权人： 陈志南
申请日： 2009-05-06 - 公布日： 2009-11-04 - 主分类号： C12N5/08 文献下载
摘要：本发明提供了一种新型哺乳动物工程细胞亚群人胚肾293细胞HEK293ar及其应用。所述的新型哺乳动物工程细胞亚群人胚肾293细胞HEK293ar由中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO：C200927。其可以用于高效瞬时转染外源基因，并能以细胞团形式生长，本发明所提供的细胞亚群具有悬浮适应生长的特点，同时又具有贴壁生长特性。可以克服目前哺乳动物工程贴壁细胞培养生产药物时基因表达产物周期短，产率低，而悬浮细胞进行外源基因瞬时转染效率低的缺点。依据本发明，可用于建立贴壁转染-悬浮培养方式生产药物蛋白的新型规模化瞬时高效转染系统和比较经济的以细胞团为生长方式的无载体固定化培养生产模式。
一种新型哺乳动物工程细胞亚群人胚肾 293 hek293ar

[发明专利]人源化单抗Hu-ScFv18的轻、重链可变区基因和其编码多肽及其应用-CN200910126143.6有效
发明人： 陈志南;杨向民;李郁;张征 -专利权人： 陈志南
申请日： 2009-02-26 - 公布日： 2009-10-07 - 主分类号： C12N15/13 文献下载
摘要：本发明涉及抗HAb18G/CD147的人源化单抗Hu-ScFv18的轻、重链可变区基因和其编码多肽及其应用。本发明应用一组设计的引物成功地将HAb18杂交瘤分泌的抗HAb18G/CD147单抗的轻、重链可变区基因进行了人源化改造，所得人源化单抗Hu-ScFv18的重链和轻链可变区基因可编码正确的抗体可变区。基于上述已克隆到的抗HAb18G/CD147的人源化单抗Hu-ScFv18轻、重链可变区基因，可以采用基因工程方法，构建和表达多种针对HAb18G/CD147分子的小分子基因工程抗体，如单链抗体、嵌合抗体、Fab抗体等，以便用于肝癌的诊断和治疗目的。
人源化单抗 hu scfv18 可变基因编码多肽及其应用

[发明专利]一种动物细胞无血清低密度培养基及其应用-CN200810150056.X有效
发明人：米力;屈颖;李玲;冯强 -专利权人： 陈志南;米力
申请日： 2008-06-16 - 公布日： 2008-12-31 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种动物细胞无血清低密度培养基及其应用，该动物细胞无血清低密度培养基以合成培养基为原材料，添加胰岛素粉末、转铁蛋白粉末、L－谷氨酰胺粉末、亚硒酸钠粉末、乙醇胺溶液、脂类溶液、表皮生长因子粉末、重组人酸性成纤维生长因子、维生素溶液、植物水解物溶液、腐胺、硫酸亚铁、氢化可的松、胰岛素类因子，此培养基能够满足哺乳动物细胞在无血清和低密度条件下的生长代谢和产物表达。通过使用动该物细胞无血清低密度培养基，结合D－多聚赖氨酸粉末包被96孔培养板可完成无血清克隆化，实现动物细胞无血清培养的连续性，提高产物表达的稳定性，确保产品质量及安全性，增强生产工艺的可控性。具有广泛的使用范围。
一种动物细胞血清密度培养基及其应用

[发明专利]一种采用复合层析介质纯化Fc融合蛋白的方法-CN200810150255.0无效
发明人：米力;唐浩;王科伟 -专利权人： 陈志南;米力
申请日： 2008-07-04 - 公布日： 2008-12-10 - 主分类号： C07K1/18 文献下载
摘要：本发明公开一种采用复合层析介质纯化Fc融合蛋白的方法，该方法采用离子交换疏水复合层析介质，调节层析缓冲系统的pH低于纯化目标蛋白的平均pI，同时调节该层析缓冲系统具有较高的离子强度，利用适当的层析条件，使纯化目标蛋白存在于流穿液中，收集该流穿液，而污染性杂质(如宿主细胞蛋白、聚合体等)则吸附到复合层析介质上，从而提高目标蛋白纯度。采用本发明的方法，最终杂质去除率达1％以上，目标蛋白纯度达99％以上，目标蛋白回收率达90％以上。本发明的方法在实现过程中衔接紧密，能够一步有效去除污染性杂质，具有稳定性好、过程控制指标明确、适合规模化生产等特点。
一种采用复合层析介质纯化 fc 融合蛋白方法

[发明专利]肿瘤靶向性重组新城疫病毒及其构建方法-CN200710018423.6有效
发明人：边惠洁;陈志南;尉丁;李亚琳;张华 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2007-08-07 - 公布日： 2008-06-25 - 主分类号： C12N15/86 文献下载
摘要：本发明涉及一种肿瘤靶向性的重组新城疫病毒及其构建方法，通过在新城疫病毒Italien株病毒基因组的HN基因开放读码框的3’通过G4S linker与肿瘤scFv序列连接，使两种蛋白能够融合表达；同时将HN基因中负责编码唾液酸受体的相关序列进行突变，使病毒丧失对唾液酸的识别与结合能力，最终使重组病毒只能与表达肿瘤相关抗原的肿瘤细胞结合并且在其中复制最终导致其死亡。本发明的有益效果是：得到了一种能够靶向性的与表达肿瘤相关抗原的肿瘤细胞结合并在其中复制，最终杀伤肿瘤细胞而对正常的人体组织细胞没有毒力的重组溶瘤新城疫病毒。为相关肿瘤的治疗研究提供一种可能的方案。
肿瘤靶向重组新城疫病及其构建方法

[发明专利]CD147胞外区晶体结构及应用-CN200710018514.X有效
发明人： 陈志南;余晓玲;朱平;杨滨;杨向民;张征 -专利权人： 陈志南
申请日： 2007-08-21 - 公布日： 2008-03-12 - 主分类号： C07K14/705 文献下载
摘要：本发明公开了CD147胞外区的晶体、三维结构以及由CD147胞外区结构得到的结构和模型。本发明还包括制备所述晶体、晶体结构和模型的方法。本发明还包括计算机模建、分子对接的方法确定CD147胞外区活性位点的方法及相应的活性位点。另外还公开了所述晶体、晶体结构和模型的用途，包括基于结构的药物设计和抗体、配体及相互作用分子的筛选和鉴定。
cd147 胞外区晶体结构应用

[发明专利]一种高效复性膜蛋白的方法-CN200710017660.0有效
发明人： 陈志南;宋斐;唐浩 -专利权人： 陈志南
申请日： 2007-04-10 - 公布日： 2007-10-17 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效复性膜蛋白的方法，该方法首先将溶解的包涵体蛋白在疏水层析柱中进行纯化，然后采用分子筛进行脱盐，最后在离子交换层析柱中进行变性剂浓度洗脱及盐浓度梯度洗脱，诱导蛋白逐渐正确折叠复性，恢复其天然活性。整个过程不使用任何小分子添加物(如GSSG，GSH、PDI等分子伴侣等)，降低了成本。该方法具有连续性强、操作简便、成本低廉的特点，通过本法可以获得纯度≥98％高均一性、高活性目标蛋白。
一种高效复性膜蛋白方法

[发明专利]HAb18GC2单抗和其轻、重链可变区基因、编码多肽及应用-CN200710007452.2有效
发明人： 陈志南;张思河;杨向民;汪莉;李郁;张征 -专利权人： 陈志南
申请日： 2007-01-16 - 公布日： 2007-10-17 - 主分类号： C07K16/18 文献下载
摘要：本发明涉及单克隆抗体HAb18GC2及其重链和轻链可变区基因、编码的多肽，以及所述单抗、重链和轻链可变区基因和多肽在制备用于逆转肝纤维化等基质沉积疾病的治疗剂中的应用。本发明的单抗HAb18GC2可与人肝纤维化组织中高表达的抗原HAb18G/CD147及肝星状细胞特异性结合；具有促进MMPs分泌，降解细胞外基质的功能。本发明人成功地克隆了该抗体的轻、重链可变区基因。基于上述基因，构建和表达成多种形式的小分子基因工程抗体，制备用于逆转肝纤维化等基质沉积相关疾病的药物。基于上述基因所编码的多肽，可以交联上多种效应分子，制备用于逆转肝纤维化等基质沉积相关疾病的药物。
hab18gc2 可变基因编码多肽应用

[发明专利]一种快速纯化制备Fab片段抗体的工艺方法-CN200610104480.1有效
发明人：米力;唐浩;申小梅 -专利权人： 陈志南
申请日： 2006-08-07 - 公布日： 2007-02-07 - 主分类号： C07K1/36 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速纯化制备片段抗体的工艺方法，该方法采用膜过滤－疏水层析I－疏水层析II三步法纯化目标产物，首先采用膜过滤分离的方式去除培养基上清中的细胞和细胞碎片，然后用分辨离率较低的疏水层析高效捕获酵母细胞大规模培养上清液中的片段抗体，并高度浓缩目标产物；最后用分辨离率较高的疏水层析，通过控制疏水层析的结合与分离条件，获取纯度不低于90％的片段抗体，整个纯化过程在12小时内即可完成。特别适宜真核细胞和原核细胞培养生产的基因工程产物的纯化，具有稳定性好、可控性强、过程控制指标明确、可操作性强、批次间结果差异小等特点。
一种快速纯化制备 fab 片段抗体工艺方法