本发明公开了一种针对可以同时检测猪血凝性脑脊髓炎病毒（PHEV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、经典猪瘟病毒（CSFV）和猪乙型脑炎病毒（JEV）的多重RT‑qPCR试剂盒及检测方法。所述试剂盒包括如序列表SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.12所示的引物和探针。所述的检测方法是将血液、脑组织、肝、肺、脾、肾、淋巴结、扁桃体等猪组织作为待测样品，先进行总DNA/RNA提取，然后将得到的总DNA/RNA作为模版，再加入上述引物和探针配制得到扩增反应液进行RT‑qPCR扩增，通过读取荧光定量PCR仪自带软件绘制的扩增曲线所对应的Ct值来进行结果判定，从而确定区分以上病毒。本发明具有灵敏度高、特异性高、操作简单的优点，可以同时、快速、准确的检测四种病毒，为实验室检测区分这四种病毒提供了有效的技术手段。
本发明公开了同时检测FCoV、FPV和FeLV的多重RT‑qPCR试剂盒及检测方法。所述的试剂盒中包括如序列表中SEQ ID NO.1～9所示的引物和探针。所述检测方法用于非疾病诊断和治疗目的，其是将从猫的鼻拭子、肛拭子、腹水和粪便等待测样品中提取的总DNA/RNA作为模版，再加入上述引物和探针配制扩增反应液并进行qRT‑PCR扩增，然后通过荧光定量PCR仪自带软件绘制扩增曲线，读取相应的Ct值并进行结果判定，从而确定并区分上述病毒，实现了对三种病毒的快速、准确的检测，为实验室检测区分上述病毒提供了有效的技术手段。
本发明公开了一种猪呼吸道冠状病毒（PRCV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪流感病毒（SIV）和猪伪狂犬病毒（PRV）的多重RT‑qPCR试剂盒及检测方法；所述试剂盒包括如序列表中SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.12所示的引物和探针。所述的检测方法是将猪组织样品、棉拭子等样品进行总RNA/DNA提取后，以得到的总RNA/DNA作为模板，再加入如序列表SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.12所示引物和探针配制得到的扩增反应液中并进行扩增，然后通过荧光定量PCR仪自带软件绘制扩增曲线并读取相应的Ct值并进行结果判定，确定并区分PRCV、PRRSV、SIV和PRV四种病毒。本发明方法具有特异性好、灵敏度高的优点，能够同时检测上述四种病毒，为实验室快速、准确的检测区分上述病毒株提供了有效的技术手段。
本发明公开了一种猪肠道冠状病毒的多重RT‑qPCR试剂盒及检测方法，所述试剂盒包括如序列表中SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.12所示的引物和探针。所述的RT‑qPCR检测方法是将猪肠道组织样品、猪的粪便或肛门拭子样品进行总RNA提取，然后将得到的总RNA作为模板，添加如序列表中SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.12所示的引物和探针配制得到扩增反应液并进行扩增反应，然后通过荧光定量PCR仪自带软件绘制扩增曲线并读取相应的Ct值并进行结果判定，确定并区分不同的猪肠道冠状病毒。本发明方法具有特异性好、灵敏度高的优点，能够同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎(TGEV)、猪δ冠状病毒(PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS‑CoV)，为实验室检测区分上述病毒株提供了有效的技术手段。
本发明公开了NDRV和MDRV两种病毒的微滴数字PCR试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括如序列表中SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所述的引物对和探针，本发明方法针对NDRV的S3基因组和MDRV的S2的基因组区域综合设计引物对和探针，并且优化用于微滴数字PCR检测的样品选取及处理方法、扩增反应液组成和配比、微滴生成和PCR扩增步骤的工作条件，得到一种快速、准确、灵敏的且能够同时检测NDRV和MDRV两种病毒的微滴数字PCR检测方法，为实验室同时鉴别检测这两种病毒提供了有效的技术手段。
