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[发明专利]一种7β-羟基类固醇脱氢酶、编码基因、载体、工程菌及应用-CN201711327005.5有效
发明人：阮礼涛;钟胡军;濮晶晶;王献周;陈茜;顾虹 -专利权人：上海奥博生物医药股份有限公司
申请日： 2017-12-13 - 公布日： 2023-08-22 - 主分类号： C12N9/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种来源于马赛梭菌(Clostridium Marseille)的7β‑羟基类固醇脱氢酶、编码基因、载体，以及其在生物催化制备熊去氧胆酸中间体3,12‑二酮‑7β‑胆烷酸中的应用，所述7β‑羟基类固醇脱氢酶的氨基酸序列如SED ID NO:1所示；本发明提供了一种立体选择性制备3,12‑二酮‑7β‑胆烷酸的新7β‑羟基类固醇脱氢酶；通过该7β‑羟基类固醇脱氢酶可制备熊去氧胆酸中间体3,12‑二酮‑7β‑胆烷酸；本发明中所述3,12‑二酮‑7β‑胆烷酸制备方法具有光学纯度高、条件温和、环境友好等优点，具有较高的工业化应用潜力。
一种羟基类固醇脱氢酶编码基因载体工程应用

[发明专利]7β-羟基类固醇脱氢酶筛选方法、编码基因及应用-CN201911354642.0在审
发明人：阮礼涛;钟胡军;丁扬阳;陈茜;顾虹 -专利权人：上海奥博生物医药技术有限公司
申请日： 2019-12-25 - 公布日： 2021-06-25 - 主分类号： C12N9/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种7β‑羟基类固醇脱氢酶筛选方法、编码基因及其在制备熊去氧胆酸及中间体中的应用；本发明提供了一种基于7β‑羟基类固醇脱氢酶蛋白三级结构的筛选方法，通过该方法挖掘了来源于Libanicoccus massiliensis、Clostridium sp.CL‑2、Clostridium butyricum的7β‑羟基类固醇脱氢酶，所述氨基酸序列如SED ID NO:1‑3所示，为此类酶的筛选提供了新的解决方案，大幅提升基因挖掘效率；通过上述系列7β‑羟基类固醇脱氢酶可立体选择性催化熊去氧胆酸中间体C‑7羰基生成7β‑羟基，具有光学纯度高、条件温和、环境友好等优点。
羟基类固醇脱氢酶筛选方法编码基因应用

[发明专利]腈水解酶启动子优化表达及应用-CN201911355889.4在审
发明人：阮礼涛;钟胡军;丁扬阳;陈茜;顾虹 -专利权人：上海奥博生物医药技术有限公司
申请日： 2019-12-25 - 公布日： 2021-06-25 - 主分类号： C12N9/78 文献下载
摘要：本发明公开了一种pET商品化质粒启动子筛选和置换方法。该方法通过从转录水平对腈水解酶的异源表达进行调节，提高腈水解酶的正确折叠比例，增加可溶性表达，解除包涵体累积对菌体生长的抑制；对启动子突变株进行摇瓶诱导表达，菌体浓度、比酶活和发酵液比酶活分别比商品化质粒提高1.4倍、1.6倍和5.5倍；同时在催化制备加巴喷丁中间体1‑氰基环己基乙酸中的反应中；启动子突变株的催化效率较原菌株提高100％以上。
水解启动子优化表达应用

[发明专利]利用1-氰基环己基乙酸直接合成加巴喷丁的方法-CN201710396386.6有效
发明人：薛亚平;郑裕国;钟胡军;徐喆 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2017-05-31 - 公布日： 2019-07-26 - 主分类号： C07C227/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用1‑氰基环己基乙酸直接合成加巴喷丁的方法：将腈水解酶基因工程菌固定化细胞分散于去离子水中，加入1‑氰基环己基乙腈，在20‑50℃、10‑350rpm条件下搅拌反应完全后，抽滤，获得滤液a；取滤液a至加氢反应釜中，加入催化剂和助剂，通入氢气，于20‑150℃、300‑1100rpm条件下反应，反应完全后将反应液分离纯化得到加巴喷丁。通过助剂的添加和升温策略的改变，在最优条件下，反应一个批次加巴喷丁收率达53.3％；通过过对1‑氰基环己基乙酸的回收并进行加氢反应，经过5次循环后，使得加巴喷丁收率达到80％以上，比已报道的化学工艺提高了近20％。
利用环己基乙酸直接合成加巴喷丁方法