本发明公开了高产孢量紫色紫孢菌基因工程菌ΔPlflbD及其构建方法与应用，属生物农药技术领域。本发明基因工程菌ΔPlflbD为敲除紫色紫孢菌的PlflbD基因；基因工程菌的保藏编号为CCTCC M 2019347，PlflbD基因的序列如SEQ ID NO.1所示，PlflbD氨基酸的序列如SEQ ID NO.2所示。本发明构建PlflbD基因敲除载体；将供体质粒、受体、PflbD基因5’端同源重组片段和3’端同源重组片段进行Gateway BP反应得到PlflbD基因敲除载体；将PlflbD基因敲除载体转入农杆菌中；再将农杆菌转化紫色紫孢菌；筛选flbD转化子，并依次采用验证引物对引物flbD验证5/flbD验证3和随机引物对随机插入验证5/随机插入验证3进行验证，即得高产孢量紫色紫孢菌的基因工程菌ΔPlflbD。
本发明公开了高产孢量紫色紫孢菌基因工程菌ΔPlflbC及其构建方法与应用，属生物农药技术领域。本发明基因工程菌ΔPlflbC为敲除紫色紫孢菌的PlflbC基因；基因工程菌的保藏编号为CCTCC M 2019348，PlflbC基因的序列如SEQ ID NO.1所示，PlflbC氨基酸的序列如SEQ ID NO.2所示。本发明利用OSCAR方法构建PlflbC基因敲除载体；将供体质粒pA‑sur(氯密磺隆抗性基因)‑OSCAR、受体pPK2‑OSCAR‑GFP、PflbC基因5’端同源重组片段和3’端同源重组片段进行Gateway BP反应得到PlflbC基因敲除载体；将PlflbC基因敲除载体转入农杆菌中得到含PlflbC基因敲除载体的农杆菌；将含PlflbC基因敲除载体的农杆菌转化紫色紫孢菌；筛选flbC转化子，并依次采用验证引物对引物flbC验证5/flbC验证3和随机引物对随机插入验证5/随机插入验证3进行验证，即得高产孢量紫色紫孢菌的基因工程菌ΔPlflbC。
