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[发明专利]一种细胞多突变位点基因成像方法-CN202310349126.9在审
发明人： 邓锐杰;刘珂芮 -专利权人：四川大学
申请日： 2023-04-04 - 公布日： 2023-08-22 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了一种细胞多突变位点基因成像方法，属于单细胞分析的领域。通过细胞内原位PCR实现信号放大与成像，利用连接反应识别单碱基突变基因，通过在不同引物上标记不同的荧光基团，实现了对于拥有不同突变位点的可视化区分。因此，本发明开发的同时成像细胞多个突变位点的成像方法，实现单个细菌的突变位点、细菌空间位置异质性的分析。
一种细胞突变基因成像方法

[发明专利]一种单碱基突变耐药菌的可视化检测技术-CN202310681447.9在审
发明人：吕远平;朱宇琳;邓锐杰;杨森;夏许寒;何强 -专利权人：四川大学
申请日： 2023-06-09 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种单碱基突变耐药菌的可视化检测技术，属于核酸检测领域。利用ARMS‑PCR识别并扩增单碱基突变基因，并且整合了CRISPR/Cas系统和G‑四链体‑Hemin催化进行可视化信号转化和输出。ARMS‑PCR和Cas12a的双重识别，实现了高特异性的高灵敏度检测，该体系能够检测到低至0.3 pg/mL的目标基因，可以在混合基因中筛选出含量仅为0.5%的单碱基突变基因，并实现生鸡蛋样品耐药沙门氏菌污染的准确检测。本发明所开发的单碱基突变检测体系，能够通过可视化快速定性分析和吸光度检测进行定量分析，有潜力被推广到耐药沙门氏菌以及其他病原菌的监控防治中。
一种碱基突变耐药可视化检测技术

[发明专利]一种沙门氏菌活菌可视化检测方法-CN202310681374.3在审
发明人：吕远平;朱宇琳;邓锐杰;夏许寒;何强 -专利权人：四川大学
申请日： 2023-06-09 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种沙门氏菌活菌可视化检测方法，属于核酸检测领域。本发明以沙门氏菌RNA为靶标，通过滚环扩增（RCA）实现了在恒温条件下对靶标的信号放大，并通过荧光成像直接计数扩增产物，实现了对沙门氏菌活菌的高灵敏、宽线性范围的可视化检测。本发明所构建的方法能够在101‑107 CFU/mL的范围内对沙门氏菌活菌进行定量，线性范围广，其检出限为10 CFU/mL。该方法能够在活/死菌混合体系内，检测低至0.1%的沙门氏菌活菌。本发明应用于巴氏杀菌法的杀菌效果评估，与标准培养法相比，回收率在85.84%‑116.51%之间，为食品微生物控制方法提供了一种新的筛选和评估工具。
一种沙门氏菌可视化检测方法

[发明专利]一种基于Cas14a的DNA条形码方法及其对转基因成分鉴定的应用-CN202310386714.X在审
发明人：任尧;刘珂芮;邓锐杰;杨淏;夏许寒;何强 -专利权人：四川大学
申请日： 2023-04-12 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明公开了一种鉴定转基因食品成分的基于CRISPR的DNA条形码方法，属于核酸检测领域。所述方法包括PCR扩增反应与CRISPR识别反应。所述PCR扩增反应体系包括通过在变温条件下重复打开、解旋、退火和延伸扩增靶核酸片段。所述CRISPR识别反应体系包括Cas14a效应蛋白、单链向导RNA和荧光报告探针。
一种基于 cas14a dna 条形码方法及其转基因成分鉴定应用

[发明专利]一种细胞单碱基突变的可视化荧光成像方法-CN202310210106.3在审
发明人： 邓锐杰;袁子岚;夏许寒;何强 -专利权人：四川大学
申请日： 2023-03-07 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了一种细胞单碱基突变的可视化荧光成像方法，属于基因检测领域。其通过LAMP核酸扩增反应，在单碱基突变位置等位基因特异性FIP引物的3'端引入人为错配来增强鉴定单碱基突变的特异性，并在FIP的5'端修饰一个荧光显色基团，进行原位Mismatch LAMP扩增反应。结合LAMP和Mismatch方法可以显著提高识别特异性，且不需要核酸变性或酶切过程。因此，本发明开发了一种Mismatch和LAMP扩增方法结合的细胞单碱基突变的可视化荧光成像方法，可以实现耐药和标准菌株区分检测，应用前景良好。
一种细胞碱基突变可视化荧光成像方法

[发明专利]一种细菌单碱基突变成像方法-CN202310210110.X在审
发明人： 邓锐杰;刘鑫淼;夏许寒;何强 -专利权人：四川大学
申请日： 2023-03-07 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于原位ARMS‑PCR和Cas标记的单碱基突变成像方法。本方法属于单细胞分析的领域。利用在PCR引物上增加碱基错配位点，实现菌内对单核苷酸变异信息的有效扩增和特异性识别。同时，通过改造后的gRNA/Cas12a 对扩增产物进行标记。使用本方法还可以在复杂环境中精准量化沙门氏菌耐药菌，并获取细胞异质性信息和空间位置信息。
一种细菌碱基突变成像方法

[发明专利]一种基于离散元的胶结型材料三轴蠕变试验模拟方法-CN201911366178.7有效
发明人：龙志林;邓锐杰;旷杜敏;匡凤兰;张婷;周煦桐;王洁 -专利权人：湘潭大学
申请日： 2019-12-26 - 公布日： 2023-06-13 - 主分类号： G06F30/23 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于离散元的胶结型材料三轴蠕变试验模拟方法，包括以下步骤：生成离散元三轴数值试样；设定墙体与块体间接触模型以及块体与块体间接触模型；试样固结；偏应力施加；试样蠕变。本发明方法简便高效，以速率过程理论为基础，将颗粒间胶结强度与时间以及颗粒间拉应力之间的相依关系引入进颗粒接触模型中，实现了胶结型材料的蠕变行为表征，为进一步研究胶结型材料的时效变形特征提供了有效技术手段。
一种基于离散胶结材料三轴蠕变试验模拟方法

[发明专利]一种病原体DNA单核苷酸突变的等温检测技术-CN202310141570.1在审
发明人： 邓锐杰;宋思硕 -专利权人：四川大学
申请日： 2023-02-21 - 公布日： 2023-06-02 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明公开了一种病原体DNA单核苷酸突变的等温检测技术，属于核酸检测领域。本发明将重组酶聚合酶扩增技术（RPA）和扩增阻碍突变系统（ARMS）融合成一种新的技术，等温扩增阻碍突变系统（iARMS）。iARMS同时具备两种技术的优势，一是扩增反应迅速并且在恒温37度下反应，二是识别单核苷酸突变能力强。当把CRISPR/Cas12a系统作为信号输出手段时，该技术允许检测低至25aM的模板分子以及0.1%的低丰度突变，应用前景广阔。
一种病原体 dna 核苷酸突变等温检测技术

[发明专利]一种多位点CRISPR的病原菌基因可视化检测方法-CN202210661918.5在审
发明人： 邓锐杰;刘鑫淼;夏许寒;何强 -专利权人：四川大学
申请日： 2022-06-13 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于多位点的CRISPR/Cas12a技术的病原菌基因可视化原位检测方法，属于细胞内基因原位检测领域。利用gRNA/Cas12a复合物对DNA reporter的反式切割活性来点亮靶基因，多位点的gRNAs设计策略可以显著提高荧光强度，在复杂环境下更快地识别靶基因，且无需对细胞进行变性及消化。因此，本发明开发的一种多位点结合的非重复基因成像方法，可以实现耐药菌与药敏菌区分的原位检测，并能适应于复杂环境（如肠道切片）。
一种多位点 crispr 病原菌基因可视化检测方法

[发明专利]一种检测单核苷酸多态性的CRISPR试剂盒-CN202210502609.3在审
发明人： 邓锐杰;袁子岚;杨淏;夏许寒;何强 -专利权人：四川大学
申请日： 2022-05-10 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测单核苷酸多态性的CRISPR试剂盒，属于核酸检测领域。通过在耐药决定区的抗性等位基因特异性正向引物的3'端引入人为错配来增强鉴定低丰度单核苷酸多态性的特异性，进行ARMS‑PCR扩增反应。继而，PCR扩增产物被特异性识别和在非等位基因位点与Cas12a‑gRNA结合，激活Cas12a报告过程。本发明还提供了一种该试剂盒在耐药细菌分析中的应用。本发明允许测定研究沙门氏菌耐药株对盐胁迫的适应，能够超灵敏检测丰度低至0.5%的SNP，应用前景良好。
一种检测核苷酸多态性 crispr 试剂盒

[发明专利]一种基于酶切保护适配体传感器的金黄色葡萄球菌快速检测方法-CN202010360739.9有效
发明人： 邓锐杰;卢云浩;杨林子 -专利权人：四川大学
申请日： 2020-04-30 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12Q1/6825 文献下载
摘要：一种基于酶切保护适配体传感器的金黄色葡萄球菌快速检测方法。所述的适配体传感器包含两条DNA序列：核酸适配体SA43和分子信标MB。该方法的作用机理在于适配体‑金黄色葡萄球菌结合体的酶切保护作用(图1)：适配体SA43能快速识别并特异性结合金黄色葡萄球菌，从而防止被外切酶酶切。进一步地，适配体可与分子信标MB稳定杂交，打开MB的发卡结构，显著提高荧光信号。相反，当样品不含金黄色葡萄球菌时，SA43易被外切酶切断，导致其无法与MB杂交。此时，MB将呈头尾自杂交结构，实现荧光猝灭。通过荧光强度与菌浓度的线性曲线，即可定量检测金黄色葡萄球菌。该方法具有适配体易合成、免培养、免分离和灵敏度高等优点。
一种基于保护适配体传感器金黄色葡萄球菌快速检测方法

[发明专利]一种基因突变原位成像方法-CN202310210105.9在审
发明人： 邓锐杰;史雅辰;夏许寒;何强 -专利权人：四川大学
申请日： 2023-03-07 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12Q1/682 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用点亮RNA适配体的单碱基突变成像方法，属于细胞内基因原位检测领域。通过连接酶辅助转录反应实现对单核苷酸位点变异（SNV）的识别，使用点亮的RNA适配体作为报告体，消除了非特异性探针结合和清洗过程，与使用荧光原位杂交方法相比，信号显著提高。因此，本发明可以精确定量细菌混合物中的耐药菌株，并鉴定从家禽养殖场分离出的耐药沙门氏菌。
一种基因突变原位成像方法

[发明专利]一种可视化核酸检测试剂盒-CN202011644377.2有效
发明人： 邓锐杰;林锋;张婷 -专利权人：四川大学华西医院
申请日： 2020-12-30 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12Q1/58 文献下载
摘要：本发明公开了一种可视化核酸检测试剂盒，属于分子检测领域。所述试剂盒包括分子识别试剂和信号转换试剂；所述分子识别试剂是嵌有金属离子的DNA双链分子，所述DNA双链分子由底物链和错配链碱基互补配对而成，其中底物链与错配链各有一个或多个C或者T碱基，在金属离子的作用下相互配对；所述信号转换试剂由脲酶、尿素和pH指示剂组成。当样品中存在靶标核酸时，靶标核酸序列与错配链竞争性结合底物链，置换出错配链，金属离子游离出来，抑制脲酶活性，进而抑制尿素分解；若无靶标核酸，脲酶会催化尿素分解产生氨，溶液pH增加，可通过pH指示剂表征。本发明的试剂盒不依赖核酸扩增反应，具有操作简便性和可视化结果呈现的功能。
一种可视化核酸检测试剂盒

[发明专利]一种定量活菌RNA单核苷酸多态性的检测技术-CN202210961460.5在审
发明人： 邓锐杰;朱宇琳;孙英;廖新浴;吕远平;何强 -专利权人：四川大学
申请日： 2022-08-11 - 公布日： 2023-03-24 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了一种定量活菌RNA单核苷酸多态性的检测技术，属于核酸检测领域。本方法整合了依赖核酸序列的扩增技术（NASBA），允许快速和特异性地产生靶RNA扩增，以及扩增阻碍突变系统（ARMS），通过在正向引物的3’端碱基处引入错配，以增强识别单核苷酸的特异性，从而对RNA突变进行高选择识别，能够灵敏地识别丰度低至0.5%的单核苷酸多态性，检测低至80 CFU沙门氏活菌。该技术允许在等温条件下扩增RNA、单管内检测RNA上的单核苷酸多态性，可用于评估消毒剂作用下耐药细菌的存在与活力，应用前景良好。
一种定量 rna 核苷酸多态性检测技术

[发明专利]一种检测外周血microRNA的试剂盒-CN202111078434.X在审
发明人： 邓锐杰;伍银环;张婷;吕远平 -专利权人：四川大学
申请日： 2021-09-14 - 公布日： 2023-03-17 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于点亮型RNA适体，通过链置换检测microRNA的方法，属于分子检测领域。其特征在于，本发明点亮型RNA适体链由DNA模板转录而得到。所述点亮型RNA适体可结合特征核酸染料并使其发射荧光。点亮型RNA适体不存在，则特征核酸染料不发荧光。所述点亮型RNA适体其模板DNA链发生错配，无法转录。当目标miRNA存在时，辅助链置换，形成含有启动子和点亮型RNA适体DNA模板的双链DNA，进一步转录得到点亮型适体。该方法不依赖逆转录和核酸扩增，一步完成靶标miRNA序列检测，非化学标记、检测成本低，操作步骤简单，且能保证较高的特异性和灵敏度，利于产业化应用。
一种检测外周血 microrna 试剂盒

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