本发明公开了一种MccY重组整合工程菌及其构建方法与应用。该MccY重组整合工程菌的构建方法包括如下步骤:(1)将sgRNA片段(SEQ ID NO.2)与T载体连接,得到pHsgRNA质粒;(2)将pCas9质粒转化大肠杆菌,并制成感受态细胞;然后将优化后的MccY的修复片段(SEQ ID NO.1)和pHsgRNA质粒转入感受态细胞中,经鉴定、培养、连续传代筛选消除双质粒的菌株,得到所述的MccY重组整合工程菌。本发明中构建得到的MccY重组整合工程菌无质粒无抗性基因,无需诱导剂,能够持续高效地分泌表达MccY,对鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、宋内志贺氏菌、痢疾志贺氏菌等有明显的抑制效果。
本发明公开了一种抗H5亚型禽流感病毒新纳米抗体及其应用,所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。并将抗体基因通过连接肽与麦芽糖结合蛋白(MBP)基因连接,构建表达载体,诱导融合蛋白表达,来促进抗H5禽流感病毒纳米抗体融合蛋白在表达系统中的可溶表达,从而解决了抗H5禽流感纳米抗体蛋白在原核系统呈不可溶的难题,提高了准确性和重复性。可用于探测、诊断、预防或治疗禽流感病毒,特别是H5亚型禽流感病毒。对鸡H5禽流感的监测具有重大的意义。
本发明属于生物药物技术领域,具体涉及一种抗H5亚型禽流感纳米抗体蛋白及其编码基因与应用。所述的抗H5亚型禽流感病毒纳米抗体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。该纳米抗体蛋白特异性针对甲型H5亚型禽流感病毒可以解决现有H5亚型禽流感诊断试剂研发过程中抗体亲和力低、生产过程中纯度低、检测过程中灵敏度低的问题。本发明进一步将抗H5亚型禽流感病毒纳米抗体蛋白在大肠杆菌体内和麦芽糖结合蛋白标签融合表达,可实现快速检测抗原,并应用于甲型H5亚型禽流感快速检测试剂盒的开发,且该融合蛋白可用于防治甲型H5亚型禽流感产品的开发。