一种苏云金芽胞杆菌营养期强启动子Prsi及其应用。本发明发现了一个在苏云金芽胞杆菌营养期工作的强启动子Prsi,具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列,其核心位点如图1所示。本发明发现的启动子为组成型强启动子,该启动子在苏云金芽胞杆菌中表达β‑半乳糖苷酶的活性是芽胞杆菌强启动子Phj3(SEQ ID NO:2所示核苷酸序列)的5倍。该启动子可以在大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌等细菌中用于构建高效表达外源蛋白。本发明还涉及基因操作所需的质粒载体,利用该启动子构建基因工程菌株的方法及相应的菌株等。