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[发明专利]猪SFTPC基因中一个可用于溯源的SNP标记及其检测方法-CN201010555545.0无效
发明人：唐雪明;吴潇;张小波;赵凯;朱宏;谭芙蓉;王金斌;蒋玲曦;陶世如 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2010-11-23 - 公布日： 2012-05-30 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明涉及一种猪SFTPC基因中一个可用于溯源的SNP分子标记及其检测方法。所述的SNP分子标记是通过DNA池(pool)测序获得，其序列如SEQ ID NO 1所示，在该SNP分子标记的第639位碱基处有一个碱基突变639A→639T，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。在包括11个猪品种或品系的试验群体中，分析该SNP分子标记在试验群体中等位基因的分布情况，发现该分子标记在不同的品种或品系中的等位基因频率接近，多态性丰富，品种或品系间等位基因频率分布差异小，并且杂合度都大于0.3，初步判定该SNP标记可用作猪肉产品DNA溯源。
sftpc 基因一个用于溯源 snp 标记及其检测方法

[发明专利]猪PSMA1基因中一个可用于溯源的SNP分子标记及其检测方法-CN201010282912.4无效
发明人：吴潇;唐雪明;张小波;赵凯;朱宏;谭芙蓉;蒋玲曦;王金斌;陶世如 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2010-09-16 - 公布日： 2012-04-04 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明涉及一种猪PSMA1基因中一个可用于溯源的SNP分子标记及其检测方法。所述的SNP分子标记是通过DNA池(pool)测序获得，其序列如SEQ ID NO 3所示，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO 4所示。所述的SNP分子标记位于序列如SEQ ID NO 1所示，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO2所示是猪PSMA1基因的DNA片段中。在包括9个猪品种/品系的试验群体中，分析本发明的SNP分子标记在试验群体中等位基因的分布情况，发现该分子标记在不同的品种或品系中的等位基因频率接近，多态性丰富，品种或品系间等位基因频率分布差异小，并且杂合度都大于0.3，由此初步判定本发明的SNP分子标记可用作猪肉产品的DNA溯源。
psma1 基因一个用于溯源 snp 分子标记及其检测方法

[发明专利]一种检测农药残留的速测卡及其制备方法和应用-CN201010282911.X无效
发明人：唐雪明;谭芙蓉;王利刚;赵凯;王金斌;吴潇;朱宏;蒋玲曦;陶世如 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2010-09-16 - 公布日： 2012-04-04 - 主分类号： C12Q1/44 文献下载
摘要：本发明涉及一种检测农药残留的速测卡及其制备方法和应用。所述速测卡包括：盖膜、第一塑料板、加样孔、酶片、塑料膜、第二塑料板和底物片。其中，所述盖膜粘贴于第一塑料板的表面上；所述第一塑料板的表面上设有至少两个加样孔，加样孔的背面粘贴有固定了家蝇乙酰胆碱酯酶的酶片，所述酶片位置与加样孔相对；所述第二塑料板上设有与所述酶片位置相对应的粘贴有固定了乙酰靛酚的底物片；所述塑料膜置于第一、第二塑料板中间。本发明的速测卡其采用的酶是经过分子进化的家蝇乙酰胆碱酯酶，具有比活性高、灵敏性好、稳定性强等优点，因而可快速简便地应用于农产品、食品、土壤尤其是蔬菜、水果中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测中。
一种检测农药残留速测卡及其制备方法应用

[发明专利]一种猪圆环病毒2型实时荧光定量PCR检测方法-CN201010271159.9有效
发明人：赵凯;唐雪明;韩芳婷;邹勇;李春华;吴潇;朱宏;谭芙蓉;王金斌;蒋玲曦;陶世如;刘启文;施伟 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2010-08-31 - 公布日： 2012-03-21 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪圆环病毒2型实时荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：1)首先设计并合成特异性引物和探针；2)目的片段的获得：配制PCR反应体系，按照PCR反应程序进行反应得到目的片段；3)配制连接反应液；4)转化并提取质粒模板；5)定性PCR检测；6)定量PCR检测。本发明的检测方法简单、快速、灵敏度高、特性性强、重复性好，并且检测的定量极限和检测极限极低，灵敏度高，可准确定量检测出猪圆环病毒2型，达到预防和控制猪圆环病毒2型流行的作用。
种猪圆环病毒实时荧光定量 pcr 检测方法

[发明专利]一种转基因香石竹Moonlite的品系特异性定性、定量PCR检测方法-CN201110247859.9无效
发明人：潘爱虎;李鹏;贾军伟;蒋玲曦;朱宏;白蓝;王金斌;唐雪明 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2011-08-26 - 公布日： 2011-12-21 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种转基因香石竹Moonlite的品系特异性定性、定量PCR检测方法，包括以下步骤：1)转基因香石竹Moonlite基因组DNA的提取；2)转基因香石竹Moonlite外源基因插入位点左边界旁邻序列的扩增和确认；3)转基因香石竹Moonlite定性PCR检测方法的建立和验证；4)转基因香石竹Moonlite定量PCR检测方法的建立和验证。本发明成功建立了适用于转基因香石竹Moonlite的品系特异性定性、定量PCR检测方法，并验证该检测方法的特异性和灵敏度，为转基因香石竹的进口检测、监管及环境安全评价提供依据。
一种转基因石竹 moonlite 品系特异性定性定量 pcr 检测方法

[发明专利]入侵植物互花米草的空中凋落物的研究方法-CN201010173745.X无效
发明人：陶世如;唐雪明;赵凯;吴潇;朱宏;谭芙蓉;王金斌;蒋玲曦 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2010-05-13 - 公布日： 2011-11-16 - 主分类号： G01N33/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种入侵植物互花米草的空中凋落物的研究方法，分别采用凋落物袋法和原位分解法研究互花米草凋落物的分解动态，研究该两种方法在互花米草空中凋落物分解过程中是否具有差异性，进而比较这两种方法的凋落物分解速率，碳、氮元素以及木质素的变化差异。本发明通过采用不同方法对互花米草凋落物的研究，可以对湿地生态系统内凋落物的研究提供一些方法上的帮助，进一步从理论上阐明互花米草入侵对凋落物库的影响，有助于大家更加深入认识植物入侵如何影响生态系统功能和过程。
入侵植物互花米草空中凋落研究方法

[发明专利]一种转基因水稻Bt蛋白cry1c的原核表达及纯化方法-CN201010578268.5无效
发明人：唐雪明;赵凯;刘启文;杨奇;吴潇;朱宏;谭芙蓉;王金斌;陶世如;蒋玲曦;程凯;魏曼曼 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2010-12-08 - 公布日： 2011-06-15 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种转基因水稻Bt蛋白crylc的原核表达及纯化方法，包括以下步骤：1)根据华中农业大学测序好的crylc的基因，以及所要连接的载体PMD18-T的多克隆位点设计正、反向引物，进行PCR扩增和回收，并对PCR回收物进行DNA连接反应；2)大肠杆菌感受态细胞DH5α的制备和转化；3)表达质粒的重组构建、重组菌的诱导表达；4)表达蛋白Ni-NTA亲和层析纯化。采用本发明方法得到的目的蛋白纯度达到90％以上，同时利用本发明制备的高纯度转基因水稻Bt蛋白crylc可获得抗体，并可制作成胶体金免疫层析试纸条，以便在转基因植物检测中快速、准确的检测出Bt基因。
一种转基因水稻 bt 蛋白 cry1c 表达纯化方法

[发明专利]一种转基因水稻Bt蛋白cry2a的原核表达及纯化方法-CN201010578641.7无效
发明人：唐雪明;赵凯;刘启文;杨奇;吴潇;朱宏;谭芙蓉;王金斌;陶世如;蒋玲曦;程凯;魏曼曼 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2010-12-08 - 公布日： 2011-06-15 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种转基因水稻Bt蛋白cry2a的原核表达及纯化方法，包括以下步骤：1)根据华中农业大学测序好的cry2a的基因，以及所要连接的载体PMD18-T的多克隆位点设计正、反向引物，进行PCR扩增和回收，并对PCR回收物进行DNA连接反应；2)大肠杆菌感受态细胞DH5α的制备和转化；3)表达质粒的重组构建、重组菌的诱导表达；4)表达蛋白Ni-NTA亲和层析纯化。采用本发明方法得到的目的蛋白纯度达到90％以上，同时利用本发明制备的高纯度转基因水稻Bt蛋白cry2a可获得抗体，并可制作成胶体金免疫层析试纸条，以便在转基因植物检测中快速、准确的检测出Bt基因。
一种转基因水稻 bt 蛋白 cry2a 表达纯化方法

[实用新型]一种检测农药残留的速测卡-CN201020530873.0无效
发明人：唐雪明;谭芙蓉;王利刚;赵凯;王金斌;吴潇;朱宏;蒋玲曦;陶世如 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2010-09-16 - 公布日： 2011-02-16 - 主分类号： G01N21/78 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种检测农药残留的速测卡，包括：盖膜、第一塑料板、加样孔、酶片、塑料膜、第二塑料板和底物片。其中，所述盖膜粘贴于第一塑料板的表面上；所述第一塑料板的表面上设有至少两个加样孔，加样孔的背面粘贴有固定了家蝇乙酰胆碱酯酶的酶片，所述酶片位置与加样孔相对；所述第二塑料板上设有与所述酶片位置相对应的粘贴有固定了乙酰靛酚的底物片；所述塑料膜置于第一、第二塑料板中间。本实用新型的速测卡在结构设计上，采用检测样品与对照样品合二为一的构思，实现了反应过程的实时观察，反应色差明显，结果判定容易。因而可广泛应用于有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测中。
一种检测农药残留速测卡

[发明专利]PSMA1基因中用于猪肉产品溯源的SNP分子标记及其检测方法-CN200910201015.3无效
发明人：唐雪明;吴潇;赵凯;朱宏;谭芙蓉;王金斌;蒋玲曦;陶世如 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2009-12-11 - 公布日： 2010-08-25 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种PSMA1基因中用于猪肉产品溯源的SNP分子标记，采用PCR--RFLP方法进行检测，通过DNApool测序获得。在包括11个猪品种或品系的试验群体中，分析该SNP分子标记在试验群体中等位基因的分布情况，发现该分子标记在不同的品种和品系中的等位基因频率接近，多态性丰富，品种或品系间等位基因频率分布差异小，初步判定该SNP标记可用作猪肉产品DNA溯源。
psma1 基因用于猪肉产品溯源 snp 分子标记及其检测方法

[发明专利]一种增强单增李斯特菌溶血素O抗原性的核苷酸序列-CN200910201071.7无效
发明人：唐雪明;赵凯;孙晓飞;王金斌;吴潇;朱宏;谭芙蓉;陶世如;蒋玲曦 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2009-12-14 - 公布日： 2010-08-25 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明公开了一种编码单增李斯特溶血素O蛋白的核苷酸基因序列。通过突变增强单增李斯特溶血素O的抗原性，制得突变用质粒模版—单增李斯特菌溶血素O核苷酸序列；然后再对该质粒模版进行定点突变，即制得本发明的核苷酸基因序列。本发明的核苷酸基因序列不但可以提高单增李斯特菌溶血素O蛋白的抗原性，而且还能显著提高乐食品中单增李斯特菌的检测灵敏度，为开发食源性病原菌检测方法提供了有用的候选基因资源。
一种增强李斯特溶血抗原性核苷酸序列

[发明专利]转基因青蒿环境释放试验的栽培管理方法-CN200910201073.6无效
发明人：唐雪明;蒋玲曦;刘华;赵凯;朱宏;谭芙蓉;王金斌;吴潇;陶世如 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2009-12-14 - 公布日： 2010-06-23 - 主分类号： A01G1/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种转基因青蒿在环境释放试验的田间设计和栽培管理方法，首先将青蒿种子种植于发苗培养基中发苗，然后将青蒿苗移栽于环境释放试验大田中，通过田间设计、合理灌溉、施肥、除草以及病虫害管理，为青蒿的生长提供合适环境条件，并采用随机区组方式种植转基因青蒿和非转基因青蒿材料，测定其基本农艺性状以及目的基因的表达情况。本发明为转基因青蒿未来的商业化生产提供了一定技术支持，并对对转基因药用植物的环境安全评价和未来转基因青蒿的大规模商业化种植具有重要意义。
转基因青蒿环境释放试验栽培管理方法

[发明专利]猪戊型肝炎病毒ELISA诊断试剂盒的制备方法-CN200910200682.X无效
发明人：赵凯;刘启文;李震;于瑞嵩;唐雪明;朱宏;谭芙蓉;吴潇;王金斌;陶世如;蒋玲曦 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2009-12-24 - 公布日： 2010-06-09 - 主分类号： G01N33/576 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪戊型肝炎病毒ELISA诊断试剂盒的制备方法，包括以下步骤：1)抗原表位的计算机筛选；2)抗原的制备；3)血清的采集；4)间接ELISA方法的建立；5)间接ELISA方法的敏感性和特异性验证；6)试剂盒的稳定性验证；7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的试剂盒能有效检出感染猪的戊型肝炎病毒，适用于大批量发病样本的检测，可用于猪戊肝的快速诊断，并预防、控制猪戊肝病毒的流行和阻断戊肝病毒由猪向人传播。
猪戊型肝炎病毒 elisa 诊断试剂盒制备方法

[发明专利]用于评价植物根系微生物群落多样性的土壤DNA间接提取方法-CN200910200685.3无效
发明人：唐雪明;王金斌;赵凯;谭芙蓉;吴潇;朱宏;陶世如;蒋玲曦;王利刚;刘华 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2009-12-24 - 公布日： 2010-06-02 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于评价植物根系微生物群落多样性的土壤DNA间接提取方法。利用细菌的平均密度远小于土壤矿物质的平均密度，在细胞裂解以前对样品进行前处理，将微生物细胞从它们土壤样品中分离出来，避免了纯化步骤存在腐殖质去除困难和DNA回收率低的问题。本发明提取过程不使用酚、氯仿，减少了对实验人员的身体健康伤害、所获DNA完整，分子片段大于10kb，产量高。所提取的土壤微生物DNA的OD260/OD230及OD260/OD280接近标准值，可直接应用于分子操作，以评价植物根系微生物群落多样件。
用于评价植物根系微生物群落多样性土壤 dna 间接提取方法

[发明专利]一种提取苏云金芽胞杆菌大质粒DNA的方法-CN200910200681.5无效
发明人：谭芙蓉;唐雪明;赵凯;王金斌;吴潇;朱宏;陶世如;蒋玲曦;王利刚;刘华 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2009-12-24 - 公布日： 2010-06-02 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开一种提取苏云金芽胞杆菌大质粒DNA的方法，包括以下步骤：1)菌体的培养与收集；2)原生体的制备；3)细胞的裂解和质粒的提取；4)质粒的纯化。应用该方法得到的质粒DNA可直接用来限制性内切酶消化、PCR扩增等多种分子生物学实验。本发明操作简便、安全、质量高，可同时适用于多种革兰氏阳性细菌质粒DNA的提取，因此具有广泛的适用性。
一种提取苏云金芽胞杆菌质粒 dna 方法

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