本发明提供了一种利用大肠杆菌生产生物活性物质人α防御素1蛋白的方法及其适用的优化设计DNA序列和重组表达质粒。包括:使用由人α防御素1成熟肽编码序列优化设计后获得的序列SEQ ID NO:1,构建成原核表达载体质粒pET32a-mHNP1,将质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,化学诱导表达人α-防御素1。本法可克服因α防御素1蛋白对宿主菌本身的毒害作用而引起的低表达甚至不表达,大量生产有活性的人α防御素1蛋白,满足有关结构、生化性质研究及抗体制备等方面的需要,也可应用于医药卫生领域。
本发明涉及一种合成的A型及O型口蹄疫双价多肽疫苗的基因序列及合成方法,合成的基因序列为SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:2所示的序列,以及根据这两个序列分别可推导出其编码的氨基酸序列SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示的序列。将该两段基因序列分别与绿色荧光蛋白基因串联,使之成为双价多肽疫苗融合基因。将该两段双价多肽疫苗融合基因分别构建到原核表达载体中,并使该两段融合基因表达为两种双价多肽疫苗蛋白,该两种蛋白的免疫原性测定表明,合成的两段多肽疫苗基因具有较好的免疫原活性。如牲畜经免疫注射后,可预防A型及O型两种口蹄疫,而且该两段双价多肽疫苗基因可以用于制备检测A型及O型两种口蹄疫的抗原。
本发明涉及用一种口蹄疫病毒(Foot and mouthdisease virus,FMDV)重组基因表达的蛋白检测罹病牲畜FMDV抗体技术。其特征在于,利用体外重组技术克隆或合成FMD疫苗基因(合成单价、多价多肽疫苗基因、亚单位疫苗基因和非结构蛋白基因等),使其在一定表达载体系统中高效表达,产生具有免疫原性的蛋白。经免疫印迹(Western-blotting)分析,其表达蛋白产物能被FMDV阳性血清所识别,显示该蛋白具有免疫学活性,从而可用该重组蛋白作为具有免疫原性的抗原来代替传统的使用病毒转染细胞制备的抗原,这样便可避免传统检测FMDV抗体中制备免疫抗原时容易发生的病毒扩散的危险性,因而更加安全,而且价格低廉。