本发明涉及一种重组二肽酶突变体及其在L‑肌肽生产中的应用,属于酶工程技术领域。本发明以二肽酶为基础,选择其第148位和第168位进行的氨基酸进行定点突变,将第148位甘氨酸突变成天冬氨酸(G148D),第168位苏氨酸突变成丝氨酸(T168S),所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,突变体酶活性比野生型高41.6%。本发明提供的二肽酶突变体催化β‑丙氨酸和L‑组氨酸合成L‑肌肽的效率更高,与野生型相比,产量提高了40.9%。本发明的重组二肽酶突变体能更好的满足工业生产需求,并解决现有技术中二肽酶活性低,表达量低,L‑肌肽的合成产量低等的问题。
本发明涉及一种合成L‑缬氨酸的大肠杆菌及其构建方法与应用,涉及生物技术领域。本发明所述大肠杆菌命名为大肠杆菌W3110,于2022年03月18日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山,保藏编号为CCTCC M 2022293。所述重组大肠杆菌以大肠杆菌为出发菌株,过表达转录调控因子,得到所述重组大肠杆菌。本发明所述的合成L‑缬氨酸的重组大肠杆菌在5L发酵罐微溶氧条件下发酵测试菌株,L‑缬氨酸产量达到92g/L,菌体OD为106。