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[发明专利]山茶品种春江红霞的多态性标记引物及山茶品种鉴定方法-CN201910305146.X有效
发明人：李纪元;潘丽芹;范正琪;殷恒福;李辛雷;何丽波;李绍翠 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2019-04-16 - 公布日： 2023-08-22 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：山茶品种‘春江红霞’的多态性标记引物及山茶品种鉴定方法，属于分子生物学技术领域。该多态性标记引物的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明以3份山茶种质的基因组DNA为模板，通过对山茶EST序列的分析，合成90对引物，并进行进一步筛选，得到一对特异性高的山茶‘春江红霞’的多态性标记引物。本发明以筛选得到的多态性特异标记引物对山茶新品种‘春江红霞’进行快速鉴别，区分山茶种质的差异性。该方法简单、快捷、准确，是一种优于表观特征鉴别的新的分子手段。
山茶品种红霞多态性标记引物鉴定方法

[发明专利]一种快速鉴别山茶品种的SSR标记引物、方法及应用-CN202310725421.X在审
发明人：李辛雷;张莹;范梦龙;宋志欣;殷恒福;范正琪;刘伟鑫;李纪元 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2023-06-19 - 公布日： 2023-08-11 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明涉及一种快速鉴别山茶品种的方法，本发明提供了自主开发的3对SSR标记引物SSR525、SSR530、SSR627，并将它们应用于山茶品种鉴别。具体根据同一引物不同山茶品种的SSR基因分型不同，鉴别不同品种。本发明得到的3对SSR引物均可以一次性将10个山茶品种全部一一区分，鉴别效率高。与传统经验鉴别方法相比准确性高、可重复性强。与观测数据定性或者定量综合判定方法相比，能够节约时间和成本。因此，利用本方法对山茶品种的鉴别具有广阔的应用前景为山茶品种有效识别及进一步开发利用提供技术支撑与科学依据。
一种快速鉴别山茶品种 ssr 标记引物方法应用

[发明专利]杜鹃红山茶CaFT基因的应用及应用方法-CN202310542815.1在审
发明人：范正琪;李纪元;刘伟鑫;殷恒福;李辛雷;王雄 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2023-05-11 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明公开了杜鹃红山茶CaFT基因的应用及应用方法，步骤为：1）植物表达载体构建；2）农杆菌侵染液制备；3）农杆菌侵染及共培养；4）筛选及诱导培养；5）抗性芽壮苗培养。本发明从杜鹃红山茶花芽中克隆到FT基因CaFT，并构建到植物表达载体pCAMBIA1301上，进一步导入农杆菌EHA105。通过重组农杆菌与佛甲草茎段的共培养，获得具有潮霉素抗性的不定芽愈伤组织并再生不定芽，杜鹃红山茶CaFT基因导入佛甲草后，促使佛甲草试管开花，在分子和生理鉴定的基础上，进一步验证了CaFT基因在佛甲草中能够表达并发挥作用，对植物开花具有促进作用，对研究CaFT基因功能及杜鹃红山茶开花分子调控机制具有重要意义。
杜鹃山茶 caft 基因应用方法

[发明专利]一种利用农杆菌瞬时转化金花茶叶片进行基因表达的方法-CN202211088560.8在审
发明人：刘伟鑫;余速航;李纪元;殷恒福;李辛雷;范正琪;王民炎 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2022-09-07 - 公布日： 2023-05-16 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：一种利用农杆菌瞬时转化金花茶叶片进行基因表达的方法，属于生物技术领域。该方法包括：选取金花茶绿叶及其枝条；将带有外源目的基因的质粒转化至农杆菌感受态细胞；挑取阳性农杆菌单克隆转入LB液体培养基中培养；侵染菌液侵染；荧光定量PCR验证目的基因的表达量情况。本发明的有益效果是：操作便捷，为金花茶基因功能验证提供新的技术手段，极大地提高效率，通过农杆菌瞬时转化金花茶离体叶片，将外源基因在金花茶叶片中成功表达，为更好地研究金花茶花色机理与开发利用奠定了基础。
一种利用杆菌瞬时转化金花茶叶进行基因表达方法

[发明专利]金花茶SSR标记引物及其在杂种鉴定中的应用-CN201910929264.8有效
发明人：李辛雷;王洁;殷恒福;范正琪;李纪元 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2019-09-29 - 公布日： 2023-01-03 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明公开金花茶SSR标记引物及其在杂种鉴定中的应用，开发了5对引物，利用SSR标记技术结合形态性状分析对金花茶杂种的真实性进行有效鉴定，从而为金花茶杂交育种提供科学依据。
金花 ssr 标记引物及其杂种鉴定中的应用

[发明专利]一种利用农杆菌瞬时转化山茶花离体花瓣进行基因表达的方法-CN202210670919.6在审
发明人： 殷恒福;黄虎;胡志康;马先进;李思佳;刘伟鑫;李纪元;范正琪;李辛雷 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2022-06-15 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：一种利用农杆菌瞬时转化山茶花离体花瓣进行基因表达的方法，属于分子生物学及生物技术领域。该方法主要包括准备花苞、准备阳性农杆菌、制备菌液、外源基因的转化及培养和瞬时表达检测步骤。本发明的有益效果是：操作便捷，大大提高了效率，通过农杆菌瞬时转化离体的山茶花瓣，筛选到了合适的侵染缓冲液，增强了花瓣瞬时转化效率和检测到了外源基因表达，为更好地研究调控山茶花色、花型、花期等方面基因的功能奠定了基础。
一种利用杆菌瞬时转化山茶花花瓣进行基因表达方法

[发明专利]一种山茶花腐病抗病性的评价方法-CN202210822194.8在审
发明人：李纪元;刘莹;耿显胜;刘伟鑫;范正琪;葛万川;殷恒福;李辛雷 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2022-07-12 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12Q1/18 文献下载
摘要：本发明提供了一种山茶花腐病抗病性的评价方法，属于植物病害评价技术领域，所述评价方法包括：将山茶叶杯菌接种在山茶花离体花瓣的伤口处，进行培养；接种72h后测量病斑面积和花瓣总面积，得到相对面积比；根据得到的相对面积比划分病害等级并给出各级范围值。根据等级赋值和发生数量，计算病情指数。依据得到的病情指数评价山茶花腐病的抗病性。采用本发明提供的方法72h即可得知待鉴定山茶的花腐病抗性水平，缩短了评价周期。
一种山茶花抗病性评价方法

[发明专利]一种金花茶CnFLS+反义F3’H双基因载体构建促进植物黄酮醇合成的方法-CN202011574583.0有效
发明人：李纪元;姜丽娜;范正琪;殷恒福;李辛雷;童冉;刘伟新 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2020-12-28 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：一种金花茶CnFLS+反义F3’H双基因载体构建促进植物黄酮醇合成的方法，属于基因工程技术领域。该方法包括：1）克隆金花茶CnFLS基因，合成烟草反义表达F3’H基因的干扰序列；2）构建CnFLS+反义F3’H双基因载体；3）将CnFLS+反义F3’H双基因载体转入大肠杆菌，测序正确后提取质粒转入农杆菌中，采用农杆菌介导的叶盘法转化本氏烟草；4）采用PCR鉴定转基因烟草阳性株系，测定阳性株系中黄酮醇、多酚的含量。本发明过表达金花茶的CnFLS基因，同时设计干扰F3’H基因的表达，CnFLS基因过表达促进合成黄酮醇，反义干扰F3’H基因的表达可抑制多酚、花青苷的合成，进而能使植物的花色变黄。
一种金花 cnfls 反义 f3 基因载体构建促进植物黄酮合成方法

[发明专利]一种金花茶CnFLS+CnUFGT14双基因载体构建促进植物黄酮醇苷合成的方法-CN202011574754.X有效
发明人：李纪元;姜丽娜;范正琪;殷恒福;李辛雷;童冉;刘伟新 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2020-12-28 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：一种金花茶CnFLS+CnUFGT14双基因载体构建促进植物黄酮醇苷合成的方法，属于基因工程技术领域。该方法包括：1）克隆金花茶CnFLS和CnUFGT14基因；2）构建双基因载体；3）将双基因载体转入大肠杆菌，测序正确后提取质粒转入农杆菌中，叶盘法转化本氏烟草；4）PCR鉴定转基因烟草阳性株系，测定阳性株系中黄酮醇苷、多酚的含量。本发明通过过表达金花茶的CnFLS基因，同时过表达CnUFGT14基因的合理设计，将CnFLS基因促进合成的黄酮醇，进而被CnUFGT14基因糖苷化形成稳定的黄酮醇苷，提高了植物中黄酮醇苷的含量，同时一定程度上抑制了多酚、花青苷的合成，进而能使植物的花色变黄。
一种金花 cnfls cnufgt14 基因载体构建促进植物黄酮合成方法

[发明专利]一种鉴定山茶花色芽变品种的方法-CN201910438877.1有效
发明人：李辛雷;王洁;殷恒福;范正琪;李纪元 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2019-05-24 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种鉴定山茶花色芽变品种的方法，利用高效液相色谱–光电二极管阵列检测和超高效液相色谱–四极杆–飞行时间质谱联用技术对山茶品种红色花瓣及其粉色与白色芽变品种花瓣中花青苷成分与含量进行研究，结合花色表型分析，对山茶花色芽变进行有效鉴定，明确山茶花色芽变与花青苷之间的关系，揭示山茶花色芽变形成的物质基础，从而为山茶花色芽变育种提供科学依据。
一种鉴定山茶花色品种方法

[发明专利]一种提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法-CN201911113311.8有效
发明人：李纪元;姜丽娜;童冉;范正琪;殷恒福;李辛雷 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2019-11-14 - 公布日： 2022-04-08 - 主分类号： A01G31/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法，其特征在于包括以下步骤：将生根2‑3周的本氏烟组培苗，从组培瓶中取出后用流水冲洗以去除根部培养基；将种植土浇透水后将种植土放入在培养盆中；将处理后的本氏烟组培苗移栽至培养盆的种植土中，然后将培养盆移入人工培养箱或人工气候室进行第一次过渡培养7‑10天；第一次过渡培养后的本氏烟组培苗移出人工培养箱或人工气候室，置于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行第二次过渡培养3‑5天；第二次过渡培养后，将生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水和施肥管理。本发明方法本氏烟组培苗的过渡培养，经人工培养箱、室内过渡，直接进行室外移栽，减少工作步骤，加快移栽过程，显著提高移栽成活率。
一种提高氏烟组培苗移栽成活率方法

[发明专利]一种耐冬山茶遗传转化的方法-CN202011007635.6在审
发明人：范正琪;李纪元;殷恒福;李辛雷 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2020-09-23 - 公布日： 2021-01-05 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：一种耐冬山茶遗传转化的方法，属于生物技术和基因工程技术领域。方法包括：1）耐冬山茶无菌苗准备，2）农杆菌侵染液制备，3）农杆菌侵染及共培养，4）农杆菌清洗，5）抗性芽筛选及诱导培养，6）抗性芽壮苗培养，7）生根培养，8）PCR鉴定。本发明提供的耐冬山茶遗传转化的方法，成功获得了耐冬山茶转基因植株，将该方法应用于山茶相关的遗传转化研究及应用中，转化效率可达4%，为转基因获得新品种提供了技术平台。
一种山茶遗传转化方法

[发明专利]一种金花茶速溶颗粒制剂及其制备工艺-CN201910452002.7在审
发明人：李纪元;范正琪;倪穗;张蕾;何丽波;李辛雷;殷恒福;李绍翠;姜丽娜;刘明靖 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2019-05-28 - 公布日： 2019-09-06 - 主分类号： A23F3/34 文献下载
摘要：一种金花茶速溶颗粒制剂及其制备工艺，属于食品加工技术领域。该方法包括以下步骤：1）筛选；2）冻干；3）粗粉制备工艺；4）提取；5）浓缩；6）干燥；7）制粒；8）包装。与现有技术相比，其有益效果在于：采用在广西种植无病虫害的金花茶为原料，其原料来源方便，制备方法简单，不含任何添加剂，制作过程有效成分流失较少，为纯天然产品，具有丰富的营养，便于食用，不仅能充分利用资源优势，延伸金花茶产业链，从生产及消费来看，金花茶颗粒制剂市场前景十分广阔。
金花茶制备工艺速溶颗粒食品加工技术领域纯天然产品金花茶颗粒制剂市场制作过程资源优势粗粉冻干制备制粒病虫害添加剂食用浓缩筛选延伸种植生产

[发明专利]一种金花茶花朵低温高圧气流破壁粉的制备方法-CN201910430313.3在审
发明人：李纪元;倪穗;范正琪;张蕾;何丽波;殷恒福;李辛雷;李绍翠;姜丽娜;刘明靖 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2019-05-22 - 公布日： 2019-08-09 - 主分类号： A23F3/34 文献下载
摘要：一种金花茶花朵低温高圧气流破壁粉的制备方法，属于食品加工技术领域。其包括以下步骤：1）筛选：盛花期，选择品质较好的金花茶花朵；2）冻干：金花茶花朵采用冻干机进行真空冷冻干燥，得到金花茶冻干花；3）粗粉制备工艺：金花茶冻干花采用中药破碎机进行破碎粗制，得到目数为60‑100目的金花茶花朵粗粉；4）破壁粉制备工艺：金花茶花朵粗粉先采用流化床气流粉碎机进行低温高压气流破壁处理，制得200目以上金花茶花朵细粉，即为破壁粉。此方法适用于工业化连续生产，方法简便，制备得到的金花茶花朵破壁粉的各有效成分含量高及得率高，便于食用和储存且工艺简单，应用前景良好。
金花茶花朵破壁粗粉制备制备工艺金花茶干花破碎机流化床气流粉碎机食品加工技术领域工业化连续生产有效成分含量真空冷冻干燥低温高压破壁处理冻干机盛花期粗制得率冻干目数细粉破碎食用储存筛选中药应用

[发明专利]一种检测山茶属植物细胞核DNA含量的方法-CN201711375776.1在审
发明人： 殷恒福;杨稳;吕焘;李纪元;李辛雷;范正琪 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2017-12-19 - 公布日： 2018-06-15 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明提供了一种检测山茶属植物细胞核DNA含量的方法，包括如下步骤：切取山茶属植物叶片或茎段，获取外植体；对所述外植体进行消毒预处理；诱导愈伤组织；处理经诱导的愈伤组织，使其发生细胞核分离,过滤；对步骤(4)得到的滤液进行染色以制备待测细胞核裂解溶液；以及通过流式细胞仪检测所述待测细胞核裂解溶液的细胞核DNA含量。本发明的方法在山茶属植物的倍型检查、基因组大小测定等方面具有应用意义，为山茶属植物的多倍体育种提供了新的分析技术。 1
山茶属植物细胞核细胞核DNA 裂解溶液外植体种检测诱导愈伤组织多倍体育种流式细胞仪消毒预处理应用意义愈伤组织基因组染色茎段切取叶片制备过滤诱导检测分析检查

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