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[发明专利]一种高效生产四氢嘧啶的重组大肠杆菌及其构建方法-CN202310870816.9在审
发明人：吴静;武耀运;刘立明;宋伟;刘佳;魏婉清;张岚东 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-07-14 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效生产四氢嘧啶的重组大肠杆菌及其构建方法，属于生物工程领域。本发明以大肠杆菌BL21为宿主，pET等系列质粒为载体，在胞内异源表达L‑二氨基丁酸转氨酶(EctBT15S/T49A/Y293M)、L‑二氨基丁酸乙酰转移酶(EctA)和四氢嘧啶合成酶(EctC)，通过质粒拷贝数优化得到最优表达载体及基因组合方式，并通过不同水平RBS调控三酶表达水平从而进一步优化体内三酶的酶活比例。以最优重组菌株作为生物催化剂进行全细胞转化，四氢嘧啶最高产量达到87.36g/L。该生产过程简单、原料易得、杂质少，具有较好的工业化应用前景。
一种高效生产嘧啶重组大肠杆菌及其构建方法

[发明专利]一种不透明红球菌L-氨基酸氧化酶突变体及其应用-CN202310078769.4在审
发明人：吴静;武耀运;何志震;陶金阳;李春旺;马腾飞;闫昕;苗登路;刘立明;宋伟;魏婉清;周怡雯;陈修来;刘佳;高聪 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-02-03 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N9/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种不透明红球菌L‑氨基酸氧化酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明克服了野生型RoLAAO催化性能差的局限，通过麦芽糖蛋白工程及组合突变设计出突变体RoLAAOY226H/D227H/Y371L/A466C/W467A，其对五种选定底物催化效率为野生型的9.2‑82.8倍，能够以L‑氨基酸(L‑Leu、L‑Ile、L‑Met、L‑Val及L‑Phe)为底物规模化制备系列α‑酮酸(α‑酮亮氨酸、α‑酮异亮氨酸、α‑酮蛋氨酸、α‑酮缬氨酸及α‑苯丙酮酸)，对应产量101g/L，转化率95％，单位菌体生产α‑酮酸的能力在5.1‑5.5g/g，为多种α‑酮酸的工业化生产奠定了基础。
一种不透明球菌氨基酸氧化酶突变体及其应用

[发明专利]一种高通量筛选α-酮酸高产菌株的方法-CN202011588760.0在审
发明人：吴静;武耀运;宋伟;周怡雯;陈修来;刘佳;高聪 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-12-29 - 公布日： 2021-04-09 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种高通量筛选α‑酮酸高产菌株方法，属于生物工程技术领域。本发明对来源于奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD进行蛋白质工程改造，并使用高通量筛选的方法，在96孔板中培养含奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的重组菌株及菌株突变体，并进行转接诱导，离心收集含奇异变形杆菌的L‑氨基酸脱氨酶PmiLAAD的细胞来转化L‑氨基酸(L‑缬氨酸、L‑甲硫氨酸及L‑苯丙氨酸)生成其对应的α‑酮酸，并利用2,4‑二硝基苯肼显色后于520nm处读取吸光值，并将吸光值大的菌株进行摇瓶验证，筛选得到α‑酮酸产量显著提高的菌株。
一种通量筛选高产菌株方法