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[发明专利]基于化学交联质谱解析的质膜蛋白质相互作用的鉴定方法-CN201811406739.7有效
发明人：张丽华;赵丽丽;赵群;李潇;杨开广;梁振;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2018-11-23 - 公布日： 2022-08-02 - 主分类号： G01N27/62 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于化学交联质谱解析的质膜蛋白质相互作用的鉴定方法，该方法首先通过在生物样品保持质膜结构存在下使用不透过质膜的化学交联试剂与质膜蛋白质发生化学交联反应，然后对质膜蛋白质进行还原、烷基化和酶解的样品预处理操作，进一步对肽段样品进行质谱鉴定和数据检索，从而实现基于化学交联质谱解析的质膜蛋白质相互作用的鉴定。本发明的优点是实验操作简单快速，可以实现质膜蛋白质相互作用的高效捕获，为研究质膜蛋白质的相互作用提供重要的技术支撑。
基于化学交联解析质膜蛋白质相互作用鉴定方法

[发明专利]表面阳离子功能化氧化石墨烯材料及制备和应用-CN201811390362.0有效
发明人：张丽华;江波;胡晔晨;杨开广;梁振;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2018-11-21 - 公布日： 2022-07-26 - 主分类号： B01J39/17 文献下载
摘要：本发明涉及一种表面阳离子功能化氧化石墨烯材料及其制备方法。根据氧化石墨烯表面羧基和咪唑分子氨基之间缩合反应，制备咪唑功能化氧化石墨烯，通过咪唑功能化氧化石墨烯与季铵离子之间反应，引入季胺离子，得到表面阳离子功能化氧化石墨烯材料。
表面阳离子功能氧化石墨材料制备应用

[发明专利]新型吡啶类有机小分子化合物修饰肉桂酸衍生物的制备及应用-CN201711282263.6有效
发明人：张丽华;韩国斌;江波;胡晔晨;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2017-12-07 - 公布日： 2022-07-19 - 主分类号： C07D213/36 文献下载
摘要：本发明涉及一种新型吡啶类有机小分子修饰的肉桂酸衍生物及其制备方法和应用。该化合物具有共轭结构，使其在紫外区有强吸收；此外其分子结构中的吡啶环，既能作为质子受体，又能作为配体与金属发生配位作用。对于上述化合物的制备，首先通过曼尼希反应合成双吡啶前体，然后通过脱水缩合得到该化合物。该发明可能在蛋白质组学有较好的应用前景和实用价值。
新型吡啶有机分子化合物修饰肉桂衍生物制备应用

[发明专利]一种离子交换色谱固定相及其制备和应用-CN201911240415.5有效
发明人：张丽华;孙悦;邵文亚;梁玉;王超;杨开广;赵宝锋;梁振;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2019-12-02 - 公布日： 2022-07-19 - 主分类号： B01J20/286 文献下载
摘要：本发明属液相色谱固定相材料和蛋白质分离领域，涉及一种离子交换色谱固定相及其制备方法和应用。以硅胶颗粒为基质，在硅胶表面修饰UiO‑66金属有机框架保护层后通过原子转移自由基聚合(ATRP)反应在表面接枝高密度聚合物刷(polymer brushes)，引入阴(阳)离子功能基团和酰胺亲水基团，并填装制备离子交换色谱柱，用于蛋白质的分离和纯化。本发明可以降低填料表面残余硅羟基对蛋白质分离造成的非特异性吸附等影响，并提供丰富的修饰位点。(提高峰容量和蛋白质回收率，并且表面的刷状构型和引入的酰胺亲水基团进一步提高色谱柱的抗污染性能。本发明中制成的离子交换色谱柱能够在非变性条件下实现蛋白质的分离和纯化。
一种离子交换色谱固定及其制备应用

[发明专利]一种高通量自动化的单细胞蛋白质组样品处理方法-CN202011373166.X在审
发明人：张丽华;贺映云;袁辉明;戴忠鹏;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2020-11-30 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： G01N30/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种自动化的高通量单细胞蛋白质组样品处理方法，是一种在液相色谱‑质谱(LC‑MS)联用分析之前进行高通量单细胞分选和单细胞蛋白质组原位样品处理的集成化方法，具体流程为：首先通过细胞分选技术将单细胞分选至96孔板中，利用加热‑冷却循环实现单细胞的裂解，然后在孔内进行原位样品处理，加入质谱兼容的表面活性剂实现蛋白质的高效提取，最后通过机器人移液平台在各个样品孔中加入胰酶，并在高功率紫外灯光照下实现蛋白质的快速酶解。96孔板中的酶解产物直接通过纳升液相色谱(Nano‑LC)进样器完成自动上样。本发明的优点是将蛋白质组样品处理和LC‑MS分析的全流程实现了自动化，从而有效避免人工操作对单细胞分析结果造成的误差和干扰。
一种通量自动化单细胞蛋白质样品处理方法

[发明专利]一种外泌体纯化的装置及应用-CN202011373189.0在审
发明人：张丽华;李一岚;袁辉明;戴忠鹏;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2020-11-30 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： C12M1/42 文献下载
摘要：本发明涉及一种外泌体纯化的装置的构建及应用。所述的纯化装置是根据外泌体的尺寸与电荷与其他物质的差异，利用样品在装置内切向流动结合滤膜尺寸筛分与电场的双重作用原理，进行污染物的去除进而实现高纯度外泌体的富集。装置包括预过滤部分和外泌体纯化部分。该装置操作简单，处理样品量大，处理时间短，污染物不易堵膜，外泌体分离纯度高且结构不易被破坏，可满足不同来源的外泌体的分离纯化需求，并可进一步应用于外泌体的蛋白质组学，载药，活性，生物学功能等的研究。
一种外泌体纯化装置应用

[发明专利]一种靶向叶绿体的包裹有交联剂的转运载体和应用-CN202011373981.6在审
发明人：张丽华;李欣蔚;杨开广;曹旭鹏;江静;陈玉宛;周雯;梁振;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2020-11-30 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： C07K17/08 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于靶向叶绿体的包裹有交联剂的转运载体的研制及其应用方法。采用纳米沉淀、乳液聚合的方法，以生物相容性较好的聚乙二醇及聚(乳酸‑羟基乙酸)为原料制备转运载体，将交联剂包裹于其中，通过信号肽作用将交联剂靶向递送至植物细胞中的叶绿体内并释放，提取相互作用的蛋白质复合物，再经点击化学及富集，结合质谱技术，实现细胞器内蛋白质复合物的原位交联。该种材料解决了交联剂跨植物细胞膜实现原位交联的障碍,为后期光合作用相关蛋白质复合物的原位分析奠定了基础。
一种靶向叶绿体包裹交联剂转运载体应用

[发明专利]一种光交联探针和基于光交联的线粒体蛋白质富集方法-CN202011374428.4在审
发明人：张丽华;陈宇文;赵群;杨开广;戴忠鹏;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2020-11-30 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： C07F9/54 文献下载
摘要：本发明涉及一种光交联探针和基于光交联的线粒体蛋白质富集方法，其特征在于：该探针可以靶向线粒体，在紫外光激发下与线粒体蛋白质发生原位的共价交联；随后，通过点击反应将捕获到蛋白质的探针生物素化，并利用链霉亲和素琼脂糖微球对线粒体蛋白质进行富集。本发明的优点是实验操作简单快捷，可以实现对线粒体蛋白质的高特异性的原位富集，为线粒体原位蛋白质组学研究提供了重要的技术支撑。
一种交联探针基于线粒体蛋白质富集方法

[发明专利]一种用于细胞内靶向线粒体的转运载体及其应用-CN202011374435.4在审
发明人：张丽华;陈玉宛;杨开广;赵群;周雯;李欣蔚;赵丽丽;高航;张玮杰;赵宝锋;梁振;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2020-11-30 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： C12N15/87 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于细胞内靶向线粒体的转运载体及其制备和在蛋白质复合物分析中的应用。在该方法中，设计制备具有靶向线粒体功能的载体，使其与细胞共同孵育后经细胞内吞，在内吞过程中载体途径其他亚细胞器后靶向递送交联剂至细胞内特定亚细胞器‑线粒体，并且原位释放化学交联剂，原位捕获线粒体或其他亚细胞器层面的蛋白质复合物信息。随后，利用基于离子液体的蛋白质提取方法，或SDS表面活性剂的蛋白质提取方法，提取蛋白质及其复合物，结合质谱技术，对线粒体以及到达线粒体之前的途径的亚细胞器层面的蛋白质复合物进行原位分析。
一种用于细胞内靶向线粒体转运载体及其应用

[发明专利]一种基于催化酶激活的靶向交联剂在蛋白分析中的应用-CN202011376268.7在审
发明人：张丽华;安雨馨;赵群;杨开广;戴忠鹏;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2020-11-30 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于催化酶激活的新型靶向交联剂，实现化学交联反应在特定亚细胞器中的靶向、可控激活，从而进行亚细胞器靶向的蛋白质复合物原位分析。该方法可在细胞原位水平上，实现在特定亚细胞器中或目标蛋白质区域范围内的的靶向性化学交联反应，从而进行亚细胞器时空分辨的蛋白质相互作用的动态变化精准解析。
一种基于催化激活靶向交联剂蛋白分析中的应用

[发明专利]一种超细内径毛细管整体柱及其制备和应用-CN202011376306.9在审
发明人：张丽华;梁玉;王超;杨开广;戴忠鹏;梁振;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2020-11-30 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： B01D15/20 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于单细胞分析的超细内径毛细管整体柱及其制备方法。所述的超细内径毛细管整体柱是在内径为10‑30μm的毛细管中通过烯基三甲(乙)氧基硅烷类和仲胺基桥联三甲(乙)氧基硅烷类的溶胶凝胶反应原位制备仲氨基桥联杂化整体材料基质，然后通过“硫巯‑烯”点击化学反应修饰功能基团制备而得。此超细内径毛细管整体柱具有以下优点：(1)与填充的方法相比，基于原位溶胶凝胶反应和表面化学反应的方法制备超细内径毛细管柱简单易行；(2)与超细内径填充柱相比，此超细内径毛细管整体柱通透性好，反压小；(3)骨架结构上的仲胺基可有效抑制残留硅羟基的非特异性吸附，从而提高了单细胞蛋白质组样品分离的峰容量和分析的灵敏度。
一种内径毛细管整体及其制备应用

[发明专利]一种海洋微生物蛋白质组的预处理方法-CN202011377686.8在审
发明人：张丽华;王松朵;刘健慧;杨开广;袁辉明;梁振;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2020-11-30 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明涉及一种海洋微生物蛋白质的预处理方法，本发明通过超声裂解破碎微生物，盐酸胍和离子液体从海洋微生物中提取出蛋白质，加入蛋白质还原剂在高温条件下使蛋白质快速变性，加入可与蛋白质巯基快速反应的固相烷基化试剂，该试剂可选择性与蛋白质上的巯基反应，离心后，反复清洗固相颗粒表面去除其它干扰小分子，即杂质(如糖、盐、表面活性剂、脂类等)，获得高纯度的蛋白质，最后加入蛋白酶将海洋微生物蛋白质酶解成肽段后，离心后获得的产物经简单处理后可直接采用液相色谱‑质谱系统进行分析。该方法特别适合细胞壁较厚破壁困难，脂质等小分子干扰严重的海洋单一、混合微生物以及实际站位海洋宏蛋白质组样品的预处理。
一种海洋微生物蛋白质预处理方法

[实用新型]一种用于生物样本光交联的交联仪-CN202122546452.8有效
发明人：张丽华;陈宇文;戴忠鹏;赵群;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2021-10-21 - 公布日： 2022-06-03 - 主分类号： G01N21/01 文献下载
摘要：本申请公开了一种用于生物样本光交联的交联仪，所述多波长光交联仪包括光照单元、生物样本冷却单元、数控单元和沿光照方向依次设置的光照处理单元、生物样品平台；所述光照单元包括光源；所述光照处理单元包括可拆卸的滤波片；所述滤波片位于光源与生物样品平台之间；所述数控单元分别与光照单元、生物样本冷却单元连接。本申请具备多波长、高能、低热、精确调控等功能，多波长光源提供高能量密度光束以保证交联反应效果的同时，生物样本冷却单元通过维持交联体系的低温环境以保证生物样品的生理条件和生理活性，为开展光交联的细胞实验以及活体实验提供了重要的仪器支撑。
一种用于生物样本交联

[发明专利]一种生物样品溶液中外泌体富集方法-CN201911226414.5有效
发明人：张丽华;李一岚;袁辉明;杨开广;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2019-12-04 - 公布日： 2022-05-31 - 主分类号： B01J20/281 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用外泌体富集材料实现生物样品溶液中外泌体的富集方法。所述的针对外泌体富集的材料是利用相反转技术制备而成的表面多孔结构聚合物微球材料。材料可利用表面孔径筛分原理实现外泌体的有效拦截及其通过内部吸附材料实现蛋白质等干扰物质的去除，可应用于血浆，尿液，细胞培养液等中的外泌体的富集。
一种生物样品溶液中外富集方法

[发明专利]用于特异性识别外泌体的替代模板印迹聚合物及其应用-CN201911228901.5有效
发明人：张丽华;刘路宽;杨开广;李欣蔚;高航;梁振;张玉奎 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2019-12-04 - 公布日： 2022-05-31 - 主分类号： C08J9/28 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于特异性识别外泌体的替代模板印迹聚合物的制备和应用方法。将替代模板，交联剂、功能单体和引发剂溶于致孔溶剂中，制备成预聚合溶液，在50‑70℃下搅拌聚合反应24‑48h。聚合后得到聚合物经研磨、筛分后，得到粒径为10‑50μm的聚合物颗粒。得到的聚合物颗粒使用刻蚀剂或高温烧蚀的方法，去除替代模板，即得到替代模板印迹聚合物。该替代模板印迹聚合物对外泌体具有很强的特异选择性和富集能力。该材料在保证富集效果的同时，能够降低初始样品需求量，可用于复杂体系中外泌体的分离、富集和纯化。
用于特异性识别外泌体替代模板印迹聚合物及其应用