本发明提供了一种靶向4D5的鼠源单克隆抗体和应用,属于免疫检测技术领域。一种靶向4D5的鼠源单克隆抗体,包括重链可变区和轻链可变区;所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示;所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。Western blot实验结果显示,采用体外重组表达的HRP标记的鼠源单克隆抗体与4D5形成明显条带,说明所述鼠源单克隆抗体具有靶向4D5的特性。靶向4D5的鼠源单克隆抗体或重组载体在制备检测4D5抗体或4D5的嵌合抗原受体阳性细胞的试剂盒中的应用。与其他检测方法相比,鼠源单克隆抗体5D1对4D5‑CAR结构结合能力最强,且检测灵敏性有较大幅度提高。