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[发明专利]适应MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基及其制备方法-CN201810276358.5有效
发明人： 朱长动;金燕斌;陈宏;李莉;王博;赵博;崔凯;黄琳;沈玥;于盼盼;吴琼;王强;曾晓敏;刘金伟;谷亮;杜晓双;胡海洋;侯雪 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司
申请日： 2018-03-30 - 公布日： 2022-02-18 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，具体而言，涉及一种适应MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基及其制备方法。该培养基包括多种氨基酸、维生素、盐类、脂类、微量元素、缓冲剂、激素等成分；该无血清培养基可采用常规的制备方法进行制取。本发明所提供的培养基用于MDCK的全悬浮培养，不产生伴随蛋白成分的副作用，安全性好，不同批次差异小，成本低，利于分离细胞下游产品、安全性好，适于用作生产疫苗等生物制品。且该培养基不仅能够减少该细胞培养时团聚的现象，还可进一步增加其耐低氧的特性，增加该细胞活率。
适应 mdck 细胞悬浮培养血清培养基及其制备方法

[发明专利]一种检测细胞源病毒抗原液的分离纯化效果的方法-CN201711405772.3有效
发明人：陈宏;赵海源;冯玉强;朱长动;李莉;蒋晓梅;张天舒;王玉红;王博;孙佰强;崔凯;胡海洋;黄琳;张倞;刘金伟;曾晓敏;王传飞 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司
申请日： 2017-12-22 - 公布日： 2021-11-26 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种检测细胞源病毒抗原液的分离纯化效果的方法，所述方法包括以下步骤：取经过分离纯化后的细胞源病毒抗原液，对所述细胞源病毒抗原液进行浊度定量检测，记为A值；如果A值≤90NTU，则所述细胞源病毒抗原液的分离纯化效果合格；若A值＞90NTU，则所述细胞源病毒抗原液的分离纯化效果不合格，继续分离纯化操作，并检测A值，直至A值≤90NTU。本发明所述方法能够相对而言较为准确地对病毒抗原的分离效果进行评估，满足疫苗生产需要，具有快速、简单、实时、性价比高的优点。
一种检测细胞病毒抗原分离纯化效果方法

[发明专利]一种重组禽流感病毒的纯化浓缩方法及其系统-CN201711407814.7有效
发明人：陈宏;赵海源;曾显营;陈化兰;李金祥;田国彬;冯玉强;李莉;朱长动;王玉红;蒋晓梅;张天舒;王博;孙佰强;崔凯;赵博;刘金伟;曾晓敏;王仁君 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
申请日： 2017-12-22 - 公布日： 2021-09-28 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明涉及病毒纯化浓缩领域，特别涉及一种重组禽流感病毒的纯化浓缩方法及其系统。一种重组禽流感病毒的纯化浓缩方法，包括以下步骤：预处理的重组禽流感病毒经离心，去除大颗粒物质和细胞碎片，得到清液；清液使用中空纤维微滤系统处理，得到透过液；透过液使用膜包超滤浓缩系统处理，收集循环液，浓缩，即得。本发明提供的纯化浓缩方法，先经高速离心去除细胞碎片和大颗粒物质，中空纤维微滤系统纯化澄清去除小颗粒蛋白，然后经膜包超滤浓缩系统进行浓缩，得到纯化浓缩的重组禽流感病毒。整个过程简单易行，并有效降低病毒中的杂质含量和杂蛋白含量，病毒中杂蛋白含量去除90％以上；在浓缩后病毒效价明显提升。
一种重组禽流感病毒纯化浓缩方法及其系统

[发明专利]一种灌流式培养全悬浮MDCK细胞生产重组禽流感病毒的方法-CN202110698280.8在审
发明人：陈宏;赵海源;王博;李莉;杨柳;冯玉强;金燕斌;赵博;孙佰强;付志鹏;崔凯;朱长动;李洋 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司
申请日： 2021-06-23 - 公布日： 2021-09-07 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种灌流式培养全悬浮MDCK细胞生产重组禽流感病毒的方法，包括：(a)当培养系统中全悬浮MDCK细胞的密度达到7×106‑10×106个/mL时，补充培养液将所述MDCK细胞的密度调整至3.5×106‑5×106个/mL；(b)接入重组禽流感病毒种毒，进行病毒扩增培养；(c)当病毒血凝价HA≥1:512时，分离并收获病毒液；(d)向所述培养系统中补入新鲜培养液，继续培养；(e)重复步骤(c)‑(d)进行病毒液的多次分离和收获，直至所述培养系统中细胞密度低于2×106个/mL后终止收获。本发明方法可稳定实现连续增殖重组禽流感病毒，一次性接入种毒，可连续收获3‑4批次病毒。
一种灌流培养悬浮 mdck 细胞生产重组禽流感病毒方法

[发明专利]油包水型复合佐剂及其制备方法和应用、疫苗的制备方法-CN202011585496.5在审
发明人：陈宏;崔凯;王博;胡海洋;赵海源;冯玉强;李洋;金燕斌;杨柳;李莉;朱长动;赵博;孙佰强;宋海岩;付志鹏;程杰;周宏宇 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司
申请日： 2020-12-28 - 公布日： 2021-04-13 - 主分类号： A61K39/39 文献下载
摘要：本发明提供了一种油包水型复合佐剂及其制备方法和应用、疫苗的制备方法，涉及生物技术领域。本发明提供的油包水型复合佐剂，按质量百分比计，包括白油79％～89％、亲水乳化剂3％～6％和亲油乳化剂8％～15％，其中白油为法国道达尔EOLANE150白油，稳定性好，碳链长度分布集中，应激小、安全性高；以特定比例的白油、亲水乳化剂和亲油乳化剂制备得到的油包水型复合佐剂的环烷基含量高，易于机体吸收；正异构比例适中，以其为原料制备得到疫苗的效价高且持续时间长。本发明提供的疫苗的制备方法简单，制备得到的疫苗稳定性好，保存时间长，免疫后抗体持续期长；黏度低，更易于注射；免疫后副反应低，免疫应答水平高。
油包水型复合佐剂及其制备方法应用疫苗

[发明专利]一种在MDCK全悬浮细胞上增殖禽流感病毒的方法及其应用-CN201810551857.0有效
发明人：陈宏;王博;赵博;崔凯;黄琳;沈玥;李莉;杜鑫;张丽娜;金燕斌;朱长动 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司
申请日： 2018-05-31 - 公布日： 2020-12-11 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种在MDCK全悬浮细胞上增殖禽流感病毒的方法及其应用。所述方法包括：将MDCK细胞全悬浮培养至7.0×106～1.0×107cells/mL时，按MOI＝0.001～0.0001接种鸡胚禽流感病毒；接毒后在pH值6.9～7.3、溶氧30～60％、温度32～37℃的环境下培养，当病毒达到足够高的滴度后分离并提纯病毒粒子。本方法由于种毒无需循环，因而缩短了生产周期，且种毒变异风险大大降低。通过本发明提供的方法培养重组禽流感病毒的HA能够达到1:1024，每1ml病毒含量≥108.0TCID50，每0.1ml病毒含量≥108.0TCID50，而种毒的接入量量减少10倍以上。
一种 mdck 悬浮细胞增殖禽流感病毒方法及其应用

[发明专利]一种油乳剂疫苗及所述疫苗的破乳方法-CN201711407804.3有效
发明人：李莉;赵海源;陈宏;朱长动;冯玉强;蒋晓梅;张天舒;王玉红;宋海岩;石莹;付春杰;张丹;孟令伟;赵鹤;张阔 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司
申请日： 2017-12-22 - 公布日： 2020-11-27 - 主分类号： A61K39/145 文献下载
摘要：本发明涉及一种油乳剂疫苗及所述疫苗的破乳方法。本发明所述油乳剂疫苗包括油相和水相，所述油相和所述水相按重量比为1～2:1混合乳化，其中，所述油相包括以下重量份原料：白油93～95份、亲油性表面活性剂5～7份和硬脂酸铝0～0.5份；所述水相包括疫苗抗原水溶液和亲水性表面活性剂，所述疫苗抗原水溶液与所述亲水性表面活性剂的重量比为95～96：4～5。本发明所述油乳剂疫苗具有黏度低、稳定好、不容易分层的优质油乳剂疫苗，同时，该疫苗还具有成本低、性价比高的优点。另外，本发明所述破乳方法通过反复冻融的方式可以有效地对前述稳定好的油乳剂疫苗进行破乳。
一种乳剂疫苗方法

[发明专利]一种悬浮细胞生产重组禽流感病毒灭活疫苗的方法-CN201711407815.1有效
发明人：陈宏;冯玉强;李金祥;朱长动;李莉;王玉红;蒋晓梅;张天舒 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司
申请日： 2017-12-22 - 公布日： 2020-10-16 - 主分类号： A61K39/145 文献下载
摘要：本发明涉及一种悬浮细胞生产重组禽流感病毒灭活疫苗的方法，包括：1).驯化种毒和MDCK细胞；2).取经摇瓶培养好的悬浮MDCK细胞，逐步放大培养直至终级反应器；待终级反应器细胞密度达到8.0×106.0～1.0×107.0个细胞/ml时接入步骤1)中驯化好的病毒进行病毒培养；所述终级反应器为3000L～6000L的生物反应器；3).当CPE达到75％以上时收获病毒液并取样检验病毒质量；将所述病毒液中的病毒纯化浓缩后进行病毒灭活，得到疫苗半成品；4).将所述疫苗半成品乳化处理后得到油乳剂疫苗，经成品质量检验后包装既得疫苗商品。本发明能够流程化地大量、安全、高效、低成本的生产禽流感疫苗。
一种悬浮细胞生产重组禽流感病毒疫苗方法

[发明专利]一种确定细胞培养基中主要酸性物质的方法-CN201711407811.3有效
发明人： 朱长动;陈宏;李莉;蒋晓梅;张天舒;冯玉强;王玉红;刘金伟;曾晓敏;吴琼;于盼盼;谷亮;王仁君;王博;赵博;崔凯 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司
申请日： 2017-12-22 - 公布日： 2020-07-24 - 主分类号： G01N33/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种确定细胞培养基中主要酸性物质的方法，所述方法包括以下步骤：培养开始前，测定所述细胞培养基的pH值，记为A值；从培养细胞的生物反应器中取培养基，测定所述培养基的pH值，记为B值；摇动所述细胞培养基，使其中的气体溢出，待气体溢出后，测定所述培养基的pH值，记为C值；比较A值、B值和C值之间的大小，确定所述细胞培养基中酸性物质的主要种类。本发明所述方法能够快速、准确地确定培养基中主要酸性物质的种类，有利于后续有针对性地脱除或中和培养基中的酸性产物，提高效率和性价比。
一种确定细胞培养基主要酸性物质方法

[发明专利]细胞培养病毒液分离纯化方法-CN201710346041.X有效
发明人：王玉红;陈宏;朱长动;冯玉强;蒋晓梅;赵海源 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司
申请日： 2017-05-17 - 公布日： 2019-12-13 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明涉及生物制药生产技术领域，具体涉及一种细胞培养病毒液分离纯化方法，包括：将细胞培养病毒液低温静置使杂质充分沉淀后用无菌处理的气体给生物反应器加压，利用提上清装置进行提上清操作得到病毒液上清；将所述病毒液上清离心后进行浓缩；所述提上清装置包括导流收液桶，所述导流收液桶的侧壁上设置有进液口，所述导流收液桶的顶端与出液管相连；所述进液口上方和下方的桶身上分别设置有上挡板和下挡板，且所述上挡板和下挡板的内径均大于所述导流收液桶的内径。该方法可用于病毒液在离心前用物理的方法进行处理，能够处理掉90％左右的可见大颗粒，大大降低后期离心的难度和时间并提高纯化效率，减少纯化设备及步骤，缩短纯化时间。
细胞培养毒液分离纯化方法

[实用新型]液体过滤系统吹残设备和液体过滤系统-CN201820130701.0有效
发明人：于盼盼;朱长动;冯玉强;吴琼;王强;由文强;陈宏;胡海洋;侯雪;李洪东 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司
申请日： 2018-01-25 - 公布日： 2019-06-21 - 主分类号： B01D29/11 文献下载
摘要：本实用新型提供了一种液体过滤系统吹残设备和液体过滤系统，涉及过滤领域。该液体过滤系统吹残设备包括压缩空气装置、纯蒸汽发生装置和洁净空气过滤装置；所述洁净空气过滤装置的进气口通过进气管与所述压缩空气装置和纯蒸汽发生装置连通，所述洁净空气过滤装置的出气口连通有出气管。所述液体过滤系统包括如上所述的液体过滤系统吹残设备，还包括至少三级依次连通的液体过滤装置；所述出气管与二级液体过滤装置的出料口连通。本实用新型解决了现有的液体过滤系统部分物料无法排出，浪费材料的技术问题。
液体过滤系统过滤装置洁净空气连通压缩空气装置液体过滤装置本实用新型发生装置出气管纯蒸汽进气口浪费材料依次连通出料口出气口进气管排出过滤

[实用新型]6000L无血清全悬浮细胞培养反应器-CN201820130737.9有效
发明人：赵海源;李金祥;冯玉强;虞永胜;朱长动;陈宏;张剑;李莉;刘金伟;曾晓敏;李洪东;王仁君;谷亮;王传飞;王博暄;杜晓双;王博;崔凯;孙佰强;陈伟 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司;江苏弗洛瑞生物工程设备有限公司
申请日： 2018-01-25 - 公布日： 2019-02-15 - 主分类号： C12M3/02 文献下载
摘要：本实用新型涉及无血清全悬浮细胞培养设备领域，具体而言，涉及一种6000L无血清全悬浮细胞培养反应器，包括罐体；所述罐体内部设置有微泡通气装置及搅拌装置；所述罐体的罐壁内部设置有挡板；所述罐体的罐壁上方设置有碱液喷射头，所述碱液喷射头通过阀门与储碱容器相连；所述罐体的罐壁上方还设置有表层进气口。本实用新型所提供的细胞培养反应器针对大容积反应器的培养特点进行了多方面的优化，尤其是对微泡通气系统、生物反应器补碱系统以及进气系统进行了优化，使得该反应器非常适合无血清全悬浮细胞培养，能够实现低剪切力下的高效氧传质、细胞和营养物质均匀混合，且有效调节罐内pH，细胞存活率高。
全悬浮无血清罐体细胞培养反应器罐壁本实用新型喷射头碱液微泡细胞培养进气口大容积反应器细胞培养设备生物反应器细胞存活率挡板罐体内部搅拌装置进气系统内部设置通气系统通气装置营养物质有效调节反应器碱容器剪切力氧传质补碱阀门优化细胞

[实用新型]一种疫苗乳化设备-CN201820130762.7有效
发明人： 朱长动;冯玉强;陈宏;赵海源;李金祥;李莉;赵鹤;陈赞文;祖恒达;刘金伟;曾晓敏;崔凯;李洪东;张阔 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司
申请日： 2018-01-25 - 公布日： 2019-02-15 - 主分类号： B01F3/08 文献下载
摘要：本实用新型涉及疫苗生产领域，具体而言，涉及一种疫苗乳化设备。所述设备包括罐体；所述罐体顶部设置有喷淋头；所述罐体内部还设置有搅拌装置及剪切装置。在进行乳化时，水相经喷淋头处理以极微小液滴形式滴加油相内，增大了水相与油相接触表面积，使水相均匀分散于油相内，从而可以在较低的搅拌转速下对抗原减少机械力的损伤以及机械力所产生的温度对抗原内有效成分的影响，在不影响整体工艺的条件下减少预混时间，提高工作效率以及提高产品整体质量。该设备改造成本低，易于整改。
疫苗乳化设备机械力喷淋头设备改造成本本实用新型极微小液滴工作效率罐体顶部罐体内部剪切装置搅拌转速搅拌装置整体工艺对抗罐体乳化预混损伤加油

[实用新型]粉末物料投加装置及含有所述装置的罐体-CN201820130736.4有效
发明人：冯玉强;朱长动;赵海源;陈宏;于盼盼;刘金伟;曾晓敏;吴琼;李洪东;由文强;胡海洋;崔凯 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司
申请日： 2018-01-25 - 公布日： 2018-10-12 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本实用新型涉及细胞培养设备领域，具体而言，涉及一种粉末物料投加装置及含有所述装置的罐体。所述装置包括密闭的储料仓；所述储料仓顶部设置有仓盖，所述储料仓底部设置有出料口，所述储料仓还设置有压缩气体注入口，所述出料口及所述压缩气体注入口可密封关闭。本装置有效的缩短了导入粉末物料时的操作时间，提高了操作的安全性，减少了对操作人员的危害，还保护了洁净区的洁净度，延长了空调的使用寿命。
储料仓粉末物料投加装置压缩气体出料口注入口罐体细胞培养设备本实用新型顶部设置使用寿命洁净度洁净区可密封密闭仓盖空调

[实用新型]配液罐-CN201820130764.6有效
发明人： 朱长动;冯玉强;虞永胜;陈宏;张剑;李莉;吴琼;于盼盼;刘金伟;曾晓敏;胡海洋;崔凯;李洪东;王强;陈伟 -专利权人：吉林冠界生物技术有限公司;江苏弗洛瑞生物工程设备有限公司
申请日： 2018-01-25 - 公布日： 2018-10-12 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本实用新型涉及细胞培养设备领域，具体而言，涉及一种配液罐，其包括罐体，所述罐体的罐壁为长筒状，罐体底部呈弧形向外拱起；所述罐体内还包括一个搅拌装置，所述搅拌装置设置于所述罐体底部中心点至所述罐壁底部所成弧线的1/2～5/6处；所述罐壁上设置有挡板。本实用新型通过巧妙地设置搅拌装置及挡板的位置，能最佳地平衡搅拌阻力并避免了涡流产生，进而能够获得最佳的搅拌效率。
搅拌装置罐壁罐体本实用新型挡板配液罐罐体底部中心细胞培养设备搅拌效率涡流产生长筒状拱起弧线体内平衡

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