本发明公开了一种与烟草PVY抗性紧密连锁的分子标记，其与野生型位点检测相关的标记命名为ASM‑W，片段大小466bp，如SEQ ID No.1所示；对应的突变位点检测相关的标记命名为ASM‑m，片段大小466bp，SEQ ID No.2所示。本发明还公开一种用于上述与烟草PVY抗性紧密连锁的分子标记的引物，引物序列如SEQ ID NO.3、4、5所示。本发明还公开了上述分子标记和引物在鉴别烟草eIF4E1基因位点的基因型中的应用。本发明的标记和引物可以作为分子标记应用于烟草种质资源鉴定和育种辅助选育，选择含有半坤村晒烟突变类型的种质材料或转育后代。
本发明涉及烟草镉转运相关NtPLA1基因及应用。所述烟草NtPAL1基因的核苷酸序列及其编码蛋白质序列分别如SEQ ID NO:1和2所示。本发明首次从烟草中克隆得到NtPAL1基因，通过转入镉敏感酵母突变株Δycf1和基因编辑证明烟草NtPAL1基因具有镉转运功能。烟草NtPAL1基因在创制镉低积累烟草种质中具有重要应用价值。
本发明公开了一种培育栽培烟草单倍体诱导系的方法，包括：用基因编辑系统编辑目的栽培烟草，获得NtDMP1基因、NtDMP2基因和NtDMP3基因同时编辑失活的纯合株系即为栽培烟草单倍体诱导系；所述NtDMP1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述NtDMP2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述NtDMP3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明通过培育烟草单倍体诱导系可以短时间内获得纯系烟草，加快烟草新品种选育进程，有效解决目前栽培烟草常规育中存在的育种周期长，且工作量巨大的问题。
