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[发明专利]对铜绿假单胞菌-烟曲霉菌混合生物被膜抑制作用的研究方法-CN201711388694.0在审
发明人： 孔晋亮;李更森;罗劲;王可;蔡双启;陈泉芳;卢桦崧 -专利权人：广西医科大学
申请日： 2017-12-21 - 公布日： 2018-06-08 - 主分类号： C12Q1/06 文献下载
摘要：本发明提供了一种密对铜绿假单胞菌‑烟曲霉菌混合生物被膜抑制作用的研究方法，包括以下步骤：烟曲霉孢子悬液的制备；铜绿假单胞菌野生菌株及其缺陷菌株菌液的制备挑取铜绿假单胞菌野生菌株单菌落及铜绿假单胞菌密度感应缺陷菌株单菌落，分别接种于培养基中，再稀释；体外静止两种混合生物被膜模型的建立实验分为6组，每组接种于细胞培养板，其中每孔已事先各放置圆形玻璃细胞爬片，再将野生型铜绿假单胞菌液及铜绿假单胞菌密度感应缺陷菌液分别加入相应组中，恒温孵育；对于上述步骤中不同生物被膜形成后，进行定量分析。本发明明确了铜绿假单胞菌密度感应系统对铜绿假单胞菌—烟曲霉菌混合生物被膜的形成具有显著的抑制作用。
铜绿假单胞菌混合生物被膜曲霉菌密度感应缺陷菌株野生菌株单菌落菌液制备接种密度感应系统细胞培养板烟曲霉孢子定量分析恒温孵育生物被膜细胞爬片圆形玻璃培养基野生型体外稀释悬液静止研究

[发明专利]一种铜绿假单胞菌‑烟曲霉菌混合生物被膜体外模型的制作方法-CN201711171536.X在审
发明人：罗劲;孔晋亮;李更森;雷丹青;黄远洁;李卫东 -专利权人：广西医科大学
申请日： 2017-11-22 - 公布日： 2018-02-02 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开一种铜绿假单胞菌‑烟曲霉菌混合生物被膜体外模型的制作方法，其制备方法是将烟曲霉菌孢子悬液接种于灭菌24孔细胞培养板16~18小时后，再接种铜绿假单胞菌菌悬液，将烟曲霉菌孢子悬液与铜绿假单胞菌菌悬液混合均匀，两者接种的菌液量之比为30~501~2，混合后于35~37℃恒温静止培养24~48小时后即得。本发明提供了铜绿假单胞菌‑烟曲霉菌混合生物被膜体外模型，对其进行体外生物被膜形态学、生长动力学及药物敏感性等基础性研究，为后续针对此类感染的基础研究提供方法学依据。
一种铜绿假单胞菌曲霉混合生物体外模型制作方法

[发明专利]杀死金黄色葡萄球菌的组合物及方法-CN201310748335.7有效
发明人：陈一强;陈艳;黄莹莹;孔晋亮;黄宏 -专利权人：陈一强
申请日： 2013-12-31 - 公布日： 2017-01-04 - 主分类号： G01N21/31 文献下载
摘要：本发明提供一种杀死金黄色葡萄球菌的方法，包括制备载体、药物调剂、制备孢子悬液、测定最低抑菌浓度MIC、制备金黄色葡萄球菌生物膜载体、药物对金黄色葡萄球菌生物膜作用和激光共聚焦显微镜观察，将亚抑菌浓度的黄芩苷破坏金黄色葡萄球菌生物膜后，结合最低杀菌浓度的万古霉素将金黄色葡萄球菌杀死。
杀死金黄色葡萄球菌组合方法

[发明专利]一种烟曲霉生物膜胞外多糖的检测方法-CN201410329799.9有效
发明人：陈一强;黄宏;孔晋亮 -专利权人：广西医科大学
申请日： 2014-07-11 - 公布日： 2016-11-30 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明公开一种烟曲霉生物膜胞外多糖的检测方法，属于生物检测技术领域。包括制备载体、收集菌株、制备烟曲霉生物膜载体、荧光染色方法和共聚焦显微镜观察；将浓度为1~5×10⁵·孢子·ml^‑1的烟曲霉放置于无菌玻璃细胞爬片，静置于35~37℃生化培养箱中培养，然后分别在培养的不同时间荧光染色，共聚焦显微镜下观察烟曲霉生物膜胞外多糖的变化。本发明提供的烟曲霉生物膜胞外多糖的检测方法实验操作简单、快速准确得出结果和重复性好。
一种曲霉生物膜多糖检测方法

[发明专利]一种烟曲霉生物膜流动模型-CN201510666979.0在审
发明人：陈一强;罗劲;李冰;孔晋亮 -专利权人：广西医科大学
申请日： 2015-10-16 - 公布日： 2016-02-03 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开一种烟曲霉生物膜流动模型，包括制备烟曲霉孢子悬液、建立生物膜流动模型和胞外基质染色及CLSM观察生物膜形成。将连接好的流动装置至于37℃恒温培养箱中，泵0.5%次氯酸钠的储液瓶消毒，随后高速流通无菌双蒸水清洗流动装置，灭菌清洗完毕后，连接泵入RPMI-1640培养基，将配制备好的孢子悬液以300μL/channel从chamber上游注入，夹闭两端，倒置2-4小时后开通，菌体表面流速为0.1-0.5mm/s；培养8h、16h、24h、48h、72h后，行胞外基质染色，CLSM观察生物被膜的形态。本发明烟曲霉生物膜流动模型具有无破坏性、实时观察等优点，可模拟植入导管相关感染的情况，是体外过渡到体内研究的研究模型。
一种曲霉生物膜流动模型

[发明专利]一种杀灭耐药烟曲霉的药物组合物及其方法-CN201410839171.3在审
发明人：陈一强;罗劲;孔晋亮 -专利权人：广西医科大学
申请日： 2014-12-30 - 公布日： 2015-04-01 - 主分类号： A61K45/06 文献下载
摘要：本发明公开一种杀灭耐药烟曲霉的药物组合物及其方法，属于微生物技术领域。所述的药物组合物为柠檬醛和抗真菌药物，所述的抗真菌药物包括两性霉素B、伏立康唑和伊曲康唑。一种杀灭耐药烟曲霉的方法，包括制备药物、制备孢子悬液、药物MIC测定和联合药敏试验。本发明药物组合物既提高了药物对耐药菌株的抗菌效果，又降低了抗真菌药物的毒副作用，是治疗抗真菌药物耐药烟曲霉感染的一种较为理想的药物组合物。
一种杀灭耐药曲霉药物组合及其方法

[发明专利]一种抑制金黄色葡萄球菌毒力因子的方法-CN201310748317.9在审
发明人：陈一强;黄莹莹;陈艳;孔晋亮;黄宏 -专利权人：陈一强
申请日： 2013-12-31 - 公布日： 2014-09-10 - 主分类号： C12N1/36 文献下载
摘要：本发明公开一种抑制金黄色葡萄球菌毒力因子的方法，包括药物干预作用、试剂配制、测量总蛋白浓度、SDS-PAGE电泳和测定溶血毒素的表达，将不同浓度的黄芩苷和黄芩素加入到含有金黄色葡萄球菌的培养基中，分别测定其总蛋白浓度，SDS-PAGE电泳进行分析，测定其溶血毒素的表达。
一种抑制金黄色葡萄球菌毒力因子方法

[发明专利]一种抑制金黄色葡萄球菌QS系统表达的方法-CN201310748089.5无效
发明人：陈一强;陈艳;黄莹莹;孔晋亮;黄宏 -专利权人：陈一强
申请日： 2013-12-31 - 公布日： 2014-09-10 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种抑制金黄色葡萄球菌QS系统表达的方法，包括PCR引物设计、提取RNA、RNA逆转录、PCR扩增目的基因和实时荧光定量PCR分析。在含有金黄色葡萄球菌的培养基加入不同浓度的黄芩素，培养10~12h后，提取其反应后的RNA，再将RNA进行逆转录，然后用PCR扩增目的基因。
一种抑制金黄色葡萄球菌 qs 系统表达方法

[发明专利]抑制烟曲霉生物膜形成的方法-CN201310720010.8有效
发明人：陈一强;黄宏;张瑾珏;孔晋亮 -专利权人：广西医科大学
申请日： 2013-12-24 - 公布日： 2014-04-09 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：一种抑制烟曲霉生物膜形成的方法，属于生物技术领域。包括制备药物、收集菌株、制备载体、制备孢子悬液、药物敏感试验、抑制烟曲霉生物膜和电镜扫描，将配置好的不同浓度的异绿原酸A和受试菌株的孢子悬液加入到已经装有载体的24孔板内，静置于35~37℃的生化培养箱中培养，分别在24h和48h取出载体以电镜扫描观察生物膜形态。本发明提供的异绿原酸A和孢子悬液的药物组只看到菌丝，胞外基质很少甚至没有，异绿原酸A能够抑制烟曲霉生物膜形成。
抑制曲霉生物膜形成方法

[发明专利]一种破坏烟曲霉生物膜的方法-CN201310720517.3有效
发明人：陈一强;黄宏;孔晋亮 -专利权人：广西医科大学
申请日： 2013-12-24 - 公布日： 2014-04-02 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明提供一种破坏烟曲霉生物膜的方法，包括制备药物、收集菌株、制备载体、制备孢子悬液、药物敏感试验、制备烟曲霉生物膜载体、药物对烟曲霉生物膜作用和结晶紫半定量，本发明利用金银花提取物的绿原酸破坏烟曲霉生物膜，用亚抑菌浓度的绿原酸破坏早期和成熟期的烟曲霉生物膜，本发明的亚抑菌浓度的绿原酸对早期及成熟期烟曲霉生物膜均具有破坏作用，破坏效果呈现出浓度依赖性。
一种破坏曲霉生物膜方法

[发明专利]杀死烟曲霉菌的组合物及方法-CN201310719704.X有效
发明人：陈一强;黄宏;孔晋亮 -专利权人：广西医科大学
申请日： 2013-12-24 - 公布日： 2014-04-02 - 主分类号： A61K31/506 文献下载
摘要：一种杀灭烟曲霉菌的组合物和杀死烟曲霉菌的方法，属于生物技术领域。杀灭烟曲霉菌的方法，包括制备药物、收集菌株、制备载体、制备孢子悬液、药物敏感试验、制备烟曲霉菌生物膜载体、药物对烟曲霉生物膜作用、XTT减低法测代谢活性、荧光染液的配制和荧光染色及观察，用绿原酸和伏立康唑联合杀死烟曲霉菌。本发明提供的一种杀死烟曲霉菌的组合物及方法，能够杀死生物膜中的烟曲霉菌丝，解决抗真菌药物无法杀死生物膜中的烟曲霉菌的难题。
杀死曲霉组合方法

[发明专利]一种烟曲霉生物膜胞外多糖的检测方法-CN201310720493.1有效
发明人：陈一强;黄宏;孔晋亮 -专利权人：广西医科大学
申请日： 2013-12-24 - 公布日： 2014-04-02 - 主分类号： G01N21/78 文献下载
摘要：本发明公开一种烟曲霉生物膜胞外多糖的检测方法，包括制备载体、收集菌株、制备烟曲霉生物膜载体、阿利新蓝刚果红染色方法和菌株观察方法；将浓度为1~5×105·孢子·ml-1的烟曲霉放置于无菌玻璃细胞爬片，静置于35~37℃生化培养箱中培养，然后分别在培养的不同时间用阿利新蓝刚果红复合染色染胞外多糖，光镜下观察烟曲霉生物膜胞外多糖的变化。本发明提供的烟曲霉生物膜胞外多糖的检测方法实验操作简单、快速准确得出结果和重复性好，适用于临床检验和实验室研究。
一种曲霉生物膜多糖检测方法

[发明专利]杀灭耐药烟曲霉的组合物及方法-CN201310720481.9有效
发明人：陈一强;黄宏;孔晋亮;温汉春 -专利权人：广西医科大学
申请日： 2013-12-24 - 公布日： 2014-04-02 - 主分类号： A61K31/7048 文献下载
摘要：一种杀灭耐药烟曲霉的组合物及方法，属于生物技术领域。一种杀灭耐药烟曲霉的方法，包括制备药物、收集菌株、制备孢子悬液、药物敏感试验和联合药敏试验，先通过本发明步骤获得两性霉素B和肉桂醛的最低抑菌浓度MIC，再利用两性霉素B和肉桂醛不同浓度的药物组合来达到杀灭耐药烟曲霉菌的作用。
杀灭耐药曲霉组合方法

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