本发明第一方面提供了一种烟草NtNramp1基因，所述烟草NtNramp1基因的CDS序列如SEQ ID No.1所示。本发明第二方面提供了一种第一方面所述的烟草NtNramp1基因在调控酵母细胞Cd含量中的用途，在酵母细胞中过表达烟草NtNramp1基因会增加酵母细胞对Cd2+的吸收，并且增加酵母细胞中Cd2+的含量。本发明通过在酵母细胞中过表达烟草NtNramp1基因可以增加酵母细胞对Cd2+的吸收，并且增加酵母细胞中Cd2+的含量。
本发明涉及一种烟草输导蛋白相关基因NtImpα4及其应用，属于植物基因工程技术领域。一种烟草输导蛋白相关的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供上述烟草输导蛋白相关基因在烟草叶片总氮和氨基酸含量调控中的应用。本发明通过CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术，构建了用于敲除NtImpα4基因的CRISPR/Cas9编辑载体，经编辑素材创制和分子检测鉴定后获得了NtImpα4基因敲除的烟草植株。本发明获得的NtImpα4基因敲除的编辑烟草植株，相比于对照烟草植株，对逆境的响应稍好，总氮和总氨基酸等指标均显著降低。
本发明第一方面提供了一种烟草NtHMA7基因，所述烟草NtHMA7基因的CDS序列如SEQ ID No.1所示。本发明第二方面提供了一种第一方面所述的烟草NtHMA7基因在烟草Cd胁迫抗性中的用途，在烟草中敲除NtHMA7基因能提高烟草对Cd胁迫的抗性，本发明为降低烟草及其制品中的Cd含量提供了一种新的方法。
本发明公开了一种烟草β‑葡葡糖苷酶相关基因NtBGLU17在调控烟草叶片次生代谢物含量中的应用。NtBGLU17基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，NtBGLU17编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明通过CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术，构建了用于敲除NtBGLU17基因的CRISPR/Cas9编辑载体，经编辑素材创制和分子检测鉴定后获得了NtBGLU17基因敲除的烟草植株。本发明获得的，NtBGLU17基因敲除的编辑烟草植株，相比于对照烟草植株，成熟期腰叶中次生代谢物含量变化显著。
本发明涉及一种基于唾液微生物检测人群是否吸烟的引物对、试剂盒及方法，属于生物信息学技术领域。该试剂盒包括引物对、PCR试剂和阴性对照；引物对包括上游引物和下游引物；上游引物依次由标签序列和上游引物序列组成；下游引物依次由标签序列和下游引物序列组成；上游引物序列如SEQ ID NO：1所示；下游引物序列如SEQ ID NO：2所示；本发明首先采集待检测人的唾液样本，之后提取唾液中的总DNA，接着进行PCR扩增，PCR产物经回收纯化后测序，并OTUs聚类和物种分类分析，之后根据分析结果进行判断。本发明能有效预测人群是否有长期吸烟习惯，检测过程无创，低成本，快速便捷，安全性高，易于推广应用。
本发明公开了一种烟草NtCrtZ基因及其应用，该烟草NtCrtZ基因为烟草β‑胡萝卜素羟化酶基因，该烟草β‑胡萝卜素羟化酶基因编码基因NtCrtZ的碱基序列如SEQ ID No.1所示；烟草β‑胡萝卜素羟化酶编码基因NtCrtZ所编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。该烟草β‑胡萝卜素羟化酶编码基因NtCrtZ或烟草β‑胡萝卜素羟化酶基因NtCrtZ在调控烟草类胡萝卜素含量及改善烟草香气质量中的应用。本申请利用NtCrtZ基因(NtCrtZ蛋白)调控类胡萝卜素代谢的作用，通过构建NtCrtZ基因缺失的转基因突变株或筛选NtCrtZ基因缺失的化学、辐射等诱变突变株，深入研究NtCrtZ基因的功能，对于烟草类胡萝卜素调控、香气质量调控具有重要的理论意义和实际应用价值。
本发明涉及一种烟草CBL相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶23基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的烟草CBL相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶23基因NtCIPK23，利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术敲除NtCIPK23基因获得在低钾条件下与对照植株相比钾离子含量降低的基因编辑植株；在低钾条件下，基因编辑植株的长势弱于对照植株，为烟草CBL相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶23基因研究及该基因在烟草钾吸收利用方面的应用提供了遗传材料和理论依据。
本发明涉及一种烟草钾离子通道基因NtKAT3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的一种烟草钾离子通道基因NtKAT3，通过CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术，构建了用于敲除NtKAT3基因的CRISPR/Cas9编辑载体，经遗传转化后获得了NtKAT3基因发生编辑的烟草植株。在MS培养条件下，所述基因发生编辑的成熟期烟草植株的打顶株高、腰叶长、腰叶宽及自然株高均低于基因未发生编辑的烟草植株。同时对NtKAT3基因编辑植株中钾含量进行测定，发现在现蕾期、打顶期、成熟期基因编辑植株中钾含量均低于基因未发生编辑的烟草植株。这为研究烟草生长发育与产量品质相关基因功能提供了遗传材料和理论依据。
