本发明公开了一种寡聚核苷酸混合物、荧光RT‑PCR检测试剂及应用。该寡聚核苷酸混合物含有以下寡聚核苷酸组合A、B、C中的一个或多个:寡聚核苷酸组合A,由三条寡聚核苷酸组成,序列分别为SEQ ID No.1、2、3;寡聚核苷酸组合B,由三条寡聚核苷酸组成,序列分别为SEQ ID No.4、5、6;寡聚核苷酸组合C,由四条寡聚核苷酸组成,序列分别为SEQ ID No.7、8、9、10。本发明所述的寡聚核苷酸混合物是基于最新的HPIV1‑3核酸序列信息设计以及基于特定的筛选原则筛选所得,具有良好的包容性、特异性和反应性能,能保证检测的准确性。