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[发明专利]通过突变degU基因提高枯草芽孢杆菌表面活性素产量的方法-CN201911313407.9有效
发明人：乔俊卿;刘邮洲;刘永锋 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2019-12-18 - 公布日： 2023-07-21 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明涉及通过突变degU基因提高枯草杆菌表面活性素(Surfactin)产量的方法，属于生物技术领域。本方法首先以枯草芽孢杆菌Bs916(CGMCC No.0808)为出发菌株，以大肠杆菌T/A克隆载体pMD19‑T Simple为骨架构建一个突变载体pT‑degU‑cm，利用同源重组原理，通过双交换过程突变枯草芽孢杆菌Bs916基因组中degU基因的策略构建了一株高产表面活性素的菌株B9ΔdegU。经过高效液相色谱分析，确定改良菌株产表面活性素的能力显著提高。随后，以菌株B9ΔdegU为出发菌株，利用Surfactin具有排油活性的能力作为指示标准，筛选影响B9ΔdegU发酵产生Surfactin的培养基成分；通过Plackett‑Burman实验设计、中心组合实验设计(CCD)和响应曲面法(RSM)，优化了B9ΔdegU高产Surfactin的发酵培养基成分。
通过突变 degu 基因提高枯草芽孢杆菌表面活性产量方法

[发明专利]贝莱斯芽孢杆菌YL2021高产嗜铁素的发酵培养方法及嗜铁素的应用-CN202210200634.6在审
发明人： 刘邮洲;刘永锋;乔俊卿;左杨;张心宁 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2022-03-02 - 公布日： 2022-12-20 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)YL2021高产嗜铁素的发酵培养方法及嗜铁素的应用，其特征在于：发酵培养基影响嗜铁素产量的三个关键因子为蔗糖、NH4Cl和MgSO4·7H2O，含量依次为6.43g/L、1.68g/L和0.15g/L，发酵培养条件影响嗜铁素产量的三个关键因子为温度、初始pH值和接种量，参数值分别为：温度30.3℃，初始pH 6.9，接种量2.3％。所述嗜铁素是贝莱斯芽孢杆菌YL2021发酵液的上清液，其特征在于：该嗜铁素为水剂；其组成及重量百分含量为：嗜铁素：89.5‑99.8％；十二烷基磺酸钠：0.1‑10％；山梨酸钾：0.1‑0.5％。应用时，将上述嗜铁素水剂在水稻茎秆和叶面均匀喷施，用于防治纹枯病、稻瘟病、白叶枯病和细菌性条斑病。优点是：利用改良后的优化培养基组分及配比和培养条件，提高发酵液嗜铁素产量。
贝莱斯芽孢杆菌 yl2021 高产嗜铁素发酵培养方法应用

[发明专利]sacB介导的绿针假单胞菌遗传操作方法-CN201811335617.3有效
发明人： 刘邮洲;周亚秋;乔俊卿;刘永锋 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2018-11-11 - 公布日： 2022-07-26 - 主分类号： C12N15/78 文献下载
摘要：本发明公开了sacB介导的绿针假单胞菌遗传操作方法，属于生物技术领域。本发明以绿针假单胞菌为起始材料，选取目标基因上下游两端的旁侧序列分别进行梯度PCR扩增，将获得的2个扩增片段和接合型自杀质粒pEX18分别进行相应的限制性酶切和连接，构建重组质粒，然后将重组质粒转化大肠杆菌中，再和野生型绿针假单胞菌两亲交配，成功实现目的基因的缺失；本发明成功构建了sacB介导的绿针假单胞菌遗传操作方法，可用于绿针假单胞菌抗菌活性物质相关基因及基因簇的作用机理和功能研究。
sacb 绿针假单胞菌遗传操作方法

[发明专利]枯草芽胞杆菌表面活性素（Surfactin）产量的提升及其应用-CN202110730695.9在审
发明人：乔俊卿;刘邮洲;刘永锋 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2021-06-29 - 公布日： 2021-10-19 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及通过基因突变和发酵工艺优化提高枯草芽胞杆菌表面活性素(Surfactin)产量的方法及其应用，属于生物技术领域。本发明以枯草芽胞杆菌Bs916(CGMCC No.0808)为原始菌株，以之前构建的高产表面活性素的菌株B9ΔdegU(申请号：201911313407.9)为基础，利用同源重组原理，再次突变枯草芽胞杆菌Bs916基因组中的bmyA基因，获得了同时突变degU和bmyA的双突变菌株B9ΔdegUΔbmyA(B9BD)。随后，以菌株B9ΔdegUΔbmyA(B9BD)为出发菌株，通过Plackett‑Burman实验设计、中心组合实验设计(CCD)和响应曲面法(RSM)优化了B9ΔdegUΔbmyA(B9BD)高产Surfactin的发酵培养基成分。经过分离纯化Surfactin后，测定了Surfactin对水稻纹枯病菌和白叶枯病菌的EC50，并利用盆栽试验初步评估了Surfactin对水稻纹枯病和白叶枯病的防治效果。
枯草杆菌表面活性 surfactin 产量提升及其应用

[发明专利]一株只对病原细菌有抑制作用、对病原真菌无抑制作用的蜡样芽孢杆菌N15-2及其应用-CN202110293278.2在审
发明人： 刘邮洲;刘永锋;乔俊卿;左杨;张心宁 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2021-03-18 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及一种生防菌剂，其中有效活性成分由蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)N15‑2组成。其特征在于：该生防菌只对病原细菌有抑制作用、对病原真菌无抑制作用；该生防菌剂是水剂，其组成与重量百分含量为：蜡样芽孢杆菌N15‑2：89.5‑99.8％；十二烷基磺酸钠：0.1‑10％；山梨酸钾：0.1‑0.5％。应用时，将上述水剂灌根用于防治大白菜软腐病和辣椒青枯病，水稻叶面均匀喷施用于防治水稻白叶枯病和水稻细菌性条斑病。其优点是：通过引进对人畜安全的蜡样芽孢杆菌N15‑2，达到利用生防菌剂防治植物细菌病害；减少化学药剂用药量；同时改善生态环境、减少化学药剂在农产品中残留量的目的。
一株只病原细菌抑制作用真菌芽孢杆菌 n15 及其应用

[发明专利]一种枯草芽孢杆菌冻干粉的制备方法-CN201710768507.5有效
发明人：杨文革;张玉皓;胡永红;周翼;曹洋;洪厚胜;章泳;樊世敏;马小平;沈飞;孙红军;刘邮洲 -专利权人：南京工业大学
申请日： 2017-08-31 - 公布日： 2021-02-19 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种枯草芽孢杆菌冻干粉的制备方法，依次包括以下步骤：(1)枯草芽孢杆菌菌悬液均匀分散于冻干保护剂溶液中形成枯草芽孢杆菌悬浮液，分装于西林瓶中，冰水浴中预冷，再投入液氮预冻；(2)将上述预冻的枯草芽孢杆菌悬浮液转移至冻干机中，真空冷冻干燥，得枯草芽孢杆菌冻干粉。本发明采用先预冷后投入液氮的方式对枯草芽孢杆菌进行适应性快速玻璃化预冻，使预冻过程中菌体损失降低，优化真空干燥参数，能有效减轻冷冻损伤和干燥应力损伤，大大提高枯草芽孢杆菌冻干粉的复壮存活率，得到的枯草芽孢菌冻干粉性质稳定、便于室温下长期储存和远距离运输，适用于科研或作为生物农药。
一种枯草芽孢杆菌干粉制备方法

[发明专利]对枯草芽孢杆菌T-500高产脂肽抗生素的摇瓶发酵工艺优化的方法-CN201710298903.6有效
发明人：乔俊卿;刘永锋;刘邮洲;张荣胜 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2017-04-25 - 公布日： 2020-12-11 - 主分类号： C12P21/00 文献下载
摘要：本发明具体涉及一种对枯草芽孢杆菌T‑500高产脂肽抗生素的摇瓶发酵工艺优化的方法，属于枯草芽孢杆菌T‑500脂肽类抗生素的发酵工艺技术领域。本发明以水稻纹枯病菌为指示菌，基于10种常用的发酵培养基，利用酸沉淀法提取脂肽类抗生素，并进行T‑500粗提液抑菌效果分析，筛选影响抑菌效果的发酵培养基成分；通过Plackett‑Burman实验设计、中心组合实验设计(CCD)和响应曲面法，优化了T‑500高产脂肽类抗生素的发酵培养基成分及发酵条件。本发明为枯草芽孢杆菌T‑500菌株工业化生产和获得高产脂肽类抗菌物质提供了技术支撑和理论指导。
枯草芽孢杆菌 500 高产抗生素发酵工艺优化方法

[发明专利]一株防治细菌病害短小芽孢杆菌ZR3-3及其应用-CN201910079259.2有效
发明人： 刘邮洲;刘永锋;周亚秋;乔俊卿;蒋春华 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2019-01-28 - 公布日： 2020-10-23 - 主分类号： A01N63/22 文献下载
摘要：本发明涉及一种生防菌剂，其中有效活性成分由短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)ZR3‑3组成。其特征在于：该生防菌剂是水剂，其组成与重量百分含量为：短小芽孢杆菌ZR3‑3：89.5‑99.8％；十二烷基磺酸钠：0.1‑10％；山梨酸钾：0.1‑0.5％。应用时，将上述水剂灌根用于防治大白菜软腐病和辣椒青枯病，水稻叶面均匀喷施用于防治水稻白叶枯病和水稻细菌性条斑病。其优点是：通过引进对人畜安全、对多种植物细菌病害具有较好防治作用的短小芽孢杆菌ZR3‑3，达到利用生防菌剂防治植物细菌病害；减少化学药剂用药量；同时改善生态环境、减少化学药剂在农产品中残留量的目的。
防治细菌病害短小芽孢杆菌 zr3 及其应用

[发明专利]一种PEG介导胶孢炭疽病菌原生质体遗传转化的方法-CN201510876528.X有效
发明人：杜艳;刘邮洲;刘永锋 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2015-12-03 - 公布日： 2019-07-05 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明公开一种PEG介导胶孢炭疽病菌原生质体遗传转化的方法，通过胶孢炭疽病菌原生质体的制备、转化和转化子的筛选，将含有筛选标记的外源DNA片段转到胶孢炭疽病菌基因组中；本发明实现了胶孢炭疽病菌原生质体遗传转化，建立了一套完整的遗传转化方法，获得大量高强度表达绿色荧光蛋白且稳定遗传的转化子，转化效率可达20‑22个转化子/ug DNA，转化效率高、稳定性好。
一种 peg 介导胶孢炭疽病菌原生质体遗传转化方法

[发明专利]枯草芽孢杆菌PTS－394可湿性粉剂田间防治辣椒根腐病的高效使用方法-CN201711118761.7在审
发明人：乔俊卿;刘邮洲;刘永锋 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2017-11-09 - 公布日： 2018-04-13 - 主分类号： A01N25/14 文献下载
摘要：本发明涉及一种枯草芽孢杆菌PTS‑394可湿性粉剂田间防治辣椒根腐病的高效使用方法，属于生防菌剂应用技术领域。该方法为枯草芽孢杆菌PTS‑394可湿性粉剂在田间的使用提供了更具体更高效的方法，不仅进一步拓展了枯草芽孢杆菌PTS‑394可湿性粉剂的使用范围及防治目标，也为枯草芽孢杆菌PTS‑394可湿性粉剂的进一步市场化和田间使用提供了理论基础。
枯草芽孢杆菌 pts 394 可湿性粉剂田间防治辣椒根腐病高效使用方法

[发明专利]一株短小芽孢杆菌N103‑1及其应用-CN201510312295.0有效
发明人：张青;刘邮洲;乔俊卿;刘永锋 -专利权人：苏州市农业科学院
申请日： 2015-06-09 - 公布日： 2018-03-02 - 主分类号： A01N63/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种生防菌剂，其中有效活性成分由短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)N103‑1组成。其特征在于分泌的代谢产物中包括蛋白酶、纤维素酶和嗜铁素三种抗菌相关物质。该生防菌剂是水剂，其组成与重量百分含量为5亿短小芽孢杆菌N103‑198.8％；NNO1.0％；山梨酸钾0.2％。在草莓苗移栽或定植时，短小芽孢杆菌N103‑1水剂1∶50‑500倍稀释液均匀喷施植物叶面，用于防治草莓炭疽病。其优点是通过引进对人畜安全、对多种植物病害具有较好防治作用的短小芽孢杆菌N103‑1，达到利用生防菌剂防治植物病害；减少化学药剂用药量、降低用药成本；同时改善生态环境、减少化学药剂在农产品中残留量的目的。
短小芽孢杆菌 n103 及其应用

[发明专利]一种发酵乳杆菌及其在植物真菌病害防治中的应用-CN201510141703.0有效
发明人：胡永红;梁萌萌;杨文革;刘翔;曹翠翠;刘邮洲 -专利权人：南京工业大学
申请日： 2015-03-27 - 公布日： 2018-02-23 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种发酵乳杆菌及其在植物真菌病害防治中的应用，属于生防制剂领域。该菌菌株是从番茄下种植的土壤中分离得到，其分类命名为发酵乳杆菌，菌种的拉丁学名是Lactobacillus fermentum，参据的微生物NJHYHWGY20130877，保藏日期是2014年01月17日，保藏中心登记入册编号是CGMCC No.8735。发酵乳杆菌经发酵培养得到发酵液，然后将发酵液浓缩制备得乳酸菌素浓缩液，再将其稀释喷洒于农作物叶面；该菌株在抑制农作物真菌病害方面效果良好，同时具有促进农作物生长的功能，符合生态农业要求。
一种发酵杆菌及其植物真菌病害防治中的应用

[发明专利]一种制备凝结芽孢杆菌预混剂的方法-CN201710769137.7在审
发明人：胡永红;曹花;杨文革;周翼;曹洋;虞龙;马小平;钱永根;刘邮洲 -专利权人：南京工业大学
申请日： 2017-08-31 - 公布日： 2018-01-12 - 主分类号： A01N25/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备凝结芽孢杆菌预混剂的方法，属于生物技术领域。本发明将凝结芽孢杆菌活化后发酵至对数生长期，添加糖、复合氮源以及无机盐，发酵结束后，发酵液经过板框压滤，闪蒸干燥粉碎，加入载体混合均匀，制粒，干燥，筛分得到凝结芽孢杆菌预混剂。该工艺成本低，操作简便，可改善土壤团粒结构，改良土壤，使植物免受病原物危害，从而促进作物生长。
一种制备凝结芽孢杆菌预混剂方法

[发明专利]一株深褐芽孢杆菌YL3及其应用-CN201510766833.3在审
发明人： 刘邮洲;陈夕军;梁雪杰;乔俊卿 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2015-11-09 - 公布日： 2016-03-23 - 主分类号： A01N63/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种生防菌剂，其中有效活性成分由深褐芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)YL3组成。其特征在于：该生防菌剂是水剂，其组成与重量百分含量为：深褐色芽孢杆菌YL3：89.5-99.8％；十二烷基磺酸钠：0.1-10％；山梨酸钾：0.1-0.5％。应用时，将上述水剂叶面喷施用于防治草莓炭疽病和草莓白粉病，灌根用于防治多种作物枯萎病等。其优点是：通过引进对人畜安全、对草莓及多种植物病害具有较好防治作用的深褐芽孢杆菌YL3，达到利用生防菌剂防治植物病害；减少化学药剂用药量；同时改善生态环境、减少化学药剂在农产品中残留量的目的。
一株深褐芽孢杆菌 yl3 及其应用

[发明专利]利用枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂防治作物土传病害的方法-CN201510760770.0在审
发明人： 刘邮洲;刘永锋;乔俊卿;梁雪杰 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2015-11-10 - 公布日： 2016-02-10 - 主分类号： A01G13/00 文献下载
摘要：本发明公开一种利用枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂防治作物土传病害的方法，步骤如下：播种时，将枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂与育苗基质按质量比1:10-100混合后播种；定植时，在定植沟或穴中均匀撒施PTS-394可湿性粉剂；定植后10-15天，再用PTS-394可湿性粉剂稀释后灌根，用以防治作物土传病害；本发明打破现有生物药剂田间使用混乱的现状，针对枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂，构建田间高效使用技术，达到既稳定高效防治作物土传病害，又能防止药害，降低用药成本，改善生态环境。
利用枯草芽孢杆菌 pts 394 可湿性粉剂防治作物病害方法

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