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[发明专利]环状RNA及载体和载体的应用-CN202211277302.4有效
发明人：陈永昌;任帅伟;黄媚;白绕仙 -专利权人：昆明理工大学;云南中科灵长类生物医学重点实验室
申请日： 2022-10-18 - 公布日： 2023-10-10 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种环状RNA及载体和载体的应用，环状RNA包括能与靶RNA通过碱基互补配对进行特异性结合的反义序列，以及连接在所述反义序列两侧的5′连接序列和3′连接序列；所述5′连接序列可以与所述3′连接序列互补配对连接形成茎环结构。载体包括环状RNA，连接在3′连接序列上的扭转核酶，连接在5′连接序列上的扭转核酶，启动子和表达载体。本发明通过环状RNA内的反义序列与前体信使mRNA进行特异性结合，阻碍剪接因子的进入来调控RNA剪接过程，可用于在RNA水平进行调控外显子跳跃，从而切除致病的外显子以纠正致病突变，可应用于制备用于调控外显子跳跃的药物以及制备用于治疗基因变异导致的疾病的药物。
环状 rna 载体应用

[发明专利]一种用于治疗杜氏肌营养不良症的CRISPR-Cas9系统-CN202211410690.9有效
发明人：陈永昌;杨娇;白绕仙;吴若;任帅伟 -专利权人：昆明理工大学;云南中科灵长类生物医学重点实验室
申请日： 2022-11-11 - 公布日： 2023-10-10 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于治疗杜氏肌营养不良症的CRISPR‑Cas9系统，包含：将发生在杜氏肌营养不良症(DMD)基因27号外显子的点突变或无义突变通过碱基的删除或添加将(3N‑1)的错误读码框纠正为(3N)恢复通读gRNA；敲除DMD基因27号外显子的gRNA；以及跳跃DMD基因27号外显子，使外显子26和28连在一起恢复通读的gRNA。本发明能较全面地对DMD基因27号外显子进行基因编辑，利用特定的CRISPR‑SaCas9、CRISPR‑SauriCas9小体积系统，有利于实现单载体递送，将来更易应用到临床；而且能为DMD非热点突变的患者制备个性化基因编辑药物。
一种用于治疗杜氏肌营养不良 crispr cas9 系统

[发明专利]针对DMD基因5号外显子突变的sgRNA及载体和应用-CN202211490617.7有效
发明人：陈永昌;白绕仙;李善刚;任帅伟;杨娇 -专利权人：昆明理工大学;云南中科灵长类生物医学重点实验室
申请日： 2022-11-25 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了针对DMD基因5号外显子突变的sgRNA及载体和应用。sgRNA为可以对突变的5号外显子进行删除的两个sgRNA，或可以对突变的5号外显子进行切割的单个sgRNA。载体为将sgRNA克隆至质粒上，然后包装为病毒。本发明针对这5号外显子的突变情况，对突变的5号外显子进行删除或进行原位切割，通过AAV局部递送CRISPR系统，使dystrophin蛋白能恢复表达；为5号外显子突变的杜氏肌营养不良症患者提供了特异性的靶序列，具有较高的打靶效率，从而纠正dystrophin mRNA的阅读框，恢复dystrophin蛋白的部分表达，为实现基因编辑个性化治疗提供可能。
针对 dmd 基因号外突变 sgrna 载体应用

[发明专利]一种间充质干细胞无血清培养基及其应用-CN202011507568.4有效
发明人：李天晴;冯春 -专利权人： 云南中科灵长类生物医学重点实验室
申请日： 2020-12-18 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种间充质干细胞无血清培养基及其应用。所述的间充质干细胞无血清培养基包括基础培养基和添加成分，其中，所述基础培养基为IMDM培养基；所述添加成分包括TGF‑β3和抗坏血酸，所述TGF‑β3的浓度为1‑5μg/L，所述抗坏血酸和TGF‑β3的用量比为25‑200mg：1‑5μg。本发明中的培养基具有良好的促细胞贴壁作用，培养所获得的细胞增殖能力强、形态完整、分泌能力强。相比传统血清培养体系和已有的无血清体系，本发明中无血清培养基的化学成分明确，且无人源或动物源蛋白、无血清，避免了动物源成分和批次的不稳定性。
一种间充质干细胞血清培养基及其应用

[发明专利]一种间充质干细胞的培养方法-CN202011507641.8有效
发明人：李天晴;冯春 -专利权人： 云南中科灵长类生物医学重点实验室
申请日： 2020-12-18 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种间充质干细胞的培养方法。在该培养方法中，使用本发明优化后的无血清培养基对间充质干细胞进行培养。此外，本发明还针对3D培养提供了更优的培养方法。通过本发明培养方法所获得的细胞增殖能力强、形态完整、分泌能力强，符合国际对间充质干细胞的质控标准。同时，本发明的培养方法可在占用较小空间、消耗很少培养基、操作更简便、工作量大大减少的条件下，通过很少的间充质干细胞扩增获得大量的间充质干细胞(尤其是人脐带间充质干细胞)，为临床领域上获得大量优质的间充质干细胞(尤其是人脐带间充质干细胞)及其分泌物提供了坚实的技术方案和理论依据。
一种间充质干细胞培养方法

[发明专利]球体物质在制备静脉注射剂中的应用-CN202210265785.X在审
发明人：徐仁和;司维;杨昌坤;李恩琴;严亚萍 -专利权人：澳门大学;云南中科灵长类生物医学重点实验室
申请日： 2022-03-17 - 公布日： 2023-01-13 - 主分类号： A61K35/28 文献下载
摘要：本发明公开了球体物质在制备静脉注射剂中的应用，涉及生物医药技术领域。本发明将MSC细胞球或生物材料形成的球体物质的静脉注射作为一种新的体内递送方案。静脉注射MSC细胞球，相对于静脉注射离散的MSC而言，减少了MSC的肺部滞留，延长了MSC在血液和外周组织中的存留时间与活力，从而可望提高对自身免疫性疾病、炎性疾病和组织器官损伤的疗效。此外，生物材料球的静脉注射也是安全的，其能够携带药物、生物活性分子或检测分子，应用于动物疾病模型或患者的诊疗，比单体分子更有效、更持久，还可携带多种分子而产生协同效应。故此，本发明为细胞和生物材料在的临床应用提供了一种新的使用途径和研究方法。
球体物质制备静脉注射中的应用

[发明专利]一种对食蟹猴干细胞荧光示踪的方法-CN202010135784.4有效
发明人：牛昱宇;吴俊模;王芳;李梦佳 -专利权人： 云南中科灵长类生物医学重点实验室
申请日： 2020-03-02 - 公布日： 2022-07-26 - 主分类号： A61K49/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种对食蟹猴干细胞荧光示踪的方法，方法包括：通过食蟹猴皮肤建立纤维细胞系，对纤维细胞进行重编程，获得食蟹猴诱导多能干细胞；根据荧光素酶基因设计引物对，荧光素酶基因与引物对进行PCR反应；限制性内切酶对AAVS1载体质粒和PCR反应产物荧光素酶基因片段进行酶切，T4连接酶连接限制酶切后的产物得到重组AAVS1‑荧光素酶质粒，重组质粒插入食蟹猴诱导多能干细胞中；将获得荧光素酶标记基因的细胞和荧光素底物静脉注射进食蟹猴体内后，放入小动物活体成像仪体内进行荧光成像。采用本方法能够无创、有效监测细胞移植后在体内的存活能力、移动位置、分布情况与增殖情况等一系列生物学变化，为大型动物细胞移植的安全性和有效性提供实时性的参考数据。
一种食蟹猴干细胞荧光方法

[发明专利]抗体-转座酶融合蛋白及其制备方法和应用-CN202111275800.0在审
发明人：陈凯;张全勇;宋宁 -专利权人：陈凯;云南中科灵长类生物医学重点实验室
申请日： 2021-10-29 - 公布日： 2022-03-01 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗体‑转座酶融合蛋白及其制备方法和应用，抗体‑转座酶融合蛋白包括His蛋白、TEV蛋白、抗体蛋白和Tn5蛋白，His蛋白依次与TEV蛋白、抗体蛋白和Tn5蛋白通过linker蛋白进行融合连接。制备方法：将目的基因插入到载体质粒的克隆位点获得可用于蛋白表达的重组质粒；将重组质粒转化至感受态细胞中进行诱导表达。本发明中的抗体‑转座酶融合蛋白，在原位对靶蛋白进行识别，将Tn5锚定在靶蛋白处，同时与Tn5连接的adaptor上加有特定的barcode序列，实现与抗体的对应，从而同时标记多个靶蛋白，并可以彼此区分，可用于制备单细胞多蛋白位点的分析试剂盒。
抗体转座酶融合蛋白及其制备方法应用

[发明专利]多能干细胞的培养基、培养方法及其应用-CN201910772540.4有效
发明人：李天晴;艾宗勇;牛宝华 -专利权人： 云南中科灵长类生物医学重点实验室
申请日： 2019-08-21 - 公布日： 2021-03-19 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及干细胞技术领域，具体涉及高质量多能干细胞的培养基、培养方法及其应用。本发明提供一种新的干细胞培养基(简称AIC培养基)，其为在基础培养基的基础上添加重组人活化素A、IWP2和CHIR99021。该培养基具有成分明确，无血清、无异源动物成分的优势。该培养基支持人多能干细胞通过单细胞传代在Feeder或Matrigel上进行稳定的贴壁培养，以及在低吸附材料上进行高效的悬浮扩增。与其他培养基相比，该培养基培养的人多能干细胞具有更高的单细胞存活率和建系效率，更快的增殖速度、更少的自发分化、更好的均质性和稳定性。AIC培养基具有现有培养体系无法比拟的优势，拥有广阔的应用前景和较高的商业价值。
多能干细胞培养基培养方法及其应用

[实用新型]一种用于灵长类动物眼动测试的非侵入式头部固定装置-CN201721107312.8有效
发明人：张波;周智刚;陈永昌;季维智 -专利权人：昆明理工大学;云南中科灵长类生物医学重点实验室
申请日： 2017-08-31 - 公布日： 2019-03-22 - 主分类号： A61D3/00 文献下载
摘要：一种用于灵长类动物眼动测试的非侵入式头部固定装置，本实用新型涉及动物实验装置。包括按照受实验动物头部塑形的低温热塑罩和用于与猴椅固定的亚克力板，其中，低温热塑罩具有可供亚克力板固定的外沿，亚克力板平行地固定夹住低温热塑罩外沿。所述亚克力板与猴椅螺栓固定，以安置处于低温热塑罩和猴椅中的实验动物。本实用新型的低温热塑罩可根据动物头部大小和形状制作，且可多次加热塑形，缩减实验成本。
热塑亚克力板头部固定装置本实用新型灵长类动物非侵入式实验动物眼动测试固定的塑形外沿动物实验装置动物头部螺栓固定实验成本固定夹加热平行安置制作

[发明专利]一种建立神经上皮干细胞的培养基、方法及其应用-CN201480002707.4有效
发明人：李天晴;季维智;李博;朱小庆 -专利权人： 云南中科灵长类生物医学重点实验室
申请日： 2014-03-25 - 公布日： 2018-05-01 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：提供一种建立神经上皮干细胞的培养基、方法及其应用。所述培养基包括用于将多能干细胞诱导分化为初级神经上皮干细胞的分化培养基及用于使初级神经上皮干细胞扩增的扩增培养基。
一种建立神经上皮干细胞培养基方法及其应用

[实用新型]一种外埠实验用动物转移和实验笼-CN201720614007.1有效
发明人：陈永昌;牛昱宇;周引;卓艳;陈兴龙 -专利权人： 云南中科灵长类生物医学重点实验室;昆明理工大学
申请日： 2017-05-31 - 公布日： 2018-01-02 - 主分类号： A01K1/02 文献下载
摘要：一种外埠实验用动物转移和实验笼，属于实验动物转移和固定的装置。本实用新型包括拉杆、笼架、网格板，所述被活动中间隔板分隔为两个，其中各设置一个“L”型不锈钢网格板和拉杆，拉杆穿入笼架与“L”网格板平行于笼门的四角固定连接，“L”网格板与笼架为移动副。所述笼架的下方安装有排泄物漏网格和对应的排泄物临时存储盘。本实用新型活动中间隔板供体型较小的动物使用，体型大的动物取出不用；分别设置的网格板沿笼架前后移动可固定动物注射实验药物。
一种外埠实验动物转移

[发明专利]多能干细胞体外定向分化为心肌细胞的方法-CN201410490078.6有效
发明人：李天晴;蒋斌;季维智 -专利权人： 云南中科灵长类生物医学重点实验室
申请日： 2014-09-23 - 公布日： 2017-07-28 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供一种在三维悬浮条件下将多能干细胞体外定向分化为心肌细胞的方法，并提供用于建立三维悬浮条件下体外诱导心肌细胞分化的培养基。所述培养基包括用于将多能干细胞诱导分化为中胚层前体细胞的分化培养基，用于将中胚层前体细胞分化为心肌细胞的分化培养基以及心肌细胞的长期维持培养基。本发明方法简单可靠，价格低廉，稳定高效，安全性高，由于采用了悬浮培养系统，可以工业化生产高品质的心肌细胞，无需任何后续的筛选和纯化步骤，可以直接用于心脏发育科学研究，心脏疾病的细胞治疗，心脏损伤的移植以及药物筛选的应用需求，具有不可估量的科学和社会经济效益。
多能干细胞体外定向化为心肌细胞方法

[发明专利]黄曲霉素诱导猕猴肝纤维化模型的方法-CN201610692028.5在审
发明人：司维;王宏;严亚萍;王峻峰;常绍辉;段艳超;牛昱宇;季维智 -专利权人： 云南中科灵长类生物医学重点实验室
申请日： 2016-08-19 - 公布日： 2017-02-22 - 主分类号： A61K31/343 文献下载
摘要：本发明是涉及黄曲霉素诱导猕猴肝纤维化模型的方法。该方法取恒河猴作为模型动物，在造模期间以0.5mg/kg的黄曲霉素加入猕猴各自的饮用水中供猕猴吮吸，每月2次，每次间隔2周，连续8个月，并饲喂粗蛋白质>19%、粗脂肪>4%的猕猴商业维持期饲料，每2个月进行病理学分析，8个月后病理学检测表现明显的肝纤维化症状。本发明方法安全可靠，缩短了动物模型的造模时间，作为筛选和预测防治肝纤维化甚至肝癌的有效药物的实验基础具有重要意义。
黄曲霉诱导猕猴纤维化模型方法

[发明专利]脑内给药建立帕金森病动物模型的专用药液、工具和方法-CN201310268450.4有效
发明人：雷小光;李浩;胡新天;张宝荣 -专利权人： 云南中科灵长类生物医学重点实验室;昆明亚灵生物科技有限公司
申请日： 2013-06-28 - 公布日： 2013-12-04 - 主分类号： A61K31/4418 文献下载
摘要：脑内给药建立帕金森病动物模型的专用药液、工具和方法，属生物医学技术。药液为将MPP+溶于生理盐水所得溶液，MPP+浓度为0.08～0.12克/毫升。工具为多点给药针管，中空金属管的一端封闭一端敞口，侧壁上开有黑质和纹状体给药侧孔。选择可同时贯穿非人灵长类动物脑内黑质和纹状体的路径为进针路径，用给药针管对黑质和纹状体二者都进行注射给药，给药总量为9～11微升，一次进针给药后12小时即可成功制备帕金森病动物模型。本发明良好地利用了中脑黑质和纹状体核团的解剖特性、化学药物的自身属性及其对多巴胺能神经元的特异性损伤效应，使得动物立即出现明显的偏侧帕金森病症状，并可以长期保持稳定，基本生理状况良好，个体差异较小。
建立帕金森病动物模型专用药液工具方法

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