本发明公开了一种蒲公英甾醇合酶，编码蒲公英甾醇合酶的基因及其制备和应用。该具蒲公英甾醇合酶活性的蛋白质是如下a)或b)或c)或d)的蛋白质：1)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白质；2)在SEQ ID NO.2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；3)将SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到具有相同功能的蛋白质。本发明克隆到一个关键蒲公英甾醇合酶基因的全长序列，并利用酵母转化技术鉴定了此蒲公英甾醇合酶基因所编码的蛋白质为多功能环化酶，能够催化2,3‑氧化鲨烯生成蒲公英甾醇，从而为利用酵母生产蒲公英甾醇提供了一个必要的基因资源。
本发明公开了一种大戟二烯醇合酶及其编码基因与应用，该大戟二烯醇合酶，如下a)或b)或c)所示：a)由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；b)在a)所示的蛋白质的羧基端或/氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白；c)将SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到具有大戟二烯醇合酶活性的蛋白质。本发明首次从绿玉树植物中分离得到一个关键OSC基因，合成大戟二烯醇合酶的基因序列以及氨基酸序列，并将该大戟二烯醇合酶基因转入酵母细胞，并以酿酒酵母为宿主菌，构建了含有来源于绿玉树的大戟二烯醇合酶基因EtOSC5的重组工程菌，转基因酵母能够以2，3‑氧化鲨烯为底物，将2，3‑氧化鲨烯环化形成大戟二烯醇和表大戟二烯醇。
本发明公开一种高温β-1,4-内切木聚糖酶和一种高温β-1,4-木糖苷酶的基因及其蛋白表达和应用。这两种酶的基因均来自热解纤维素菌Caldicellulosiruptor owensensis OL。高温木聚糖酶Co Xylanase A基因序列如SEQ ID NO.1所示，蛋白序列如SEQ ID NO.2所示。高温木糖苷酶Co Xylosidase A基因序列如SEQ ID NO.3所示，蛋白序列如SEQ ID NO.4所示。高温木聚糖酶能有效降解木聚糖为寡聚木糖，其最适反应温度为75℃，最适反应pH值为7.0，并在55-85℃，pH5.5-8.5均保持良好的反应活性。高温木糖苷酶能有效降解寡聚木糖为单糖，其最适反应温度为75℃，最适反应pH值为5.0，并在60-85℃，pH4.5-6.0均有良好的反应活性。两种酶协同作用,可将天然木聚糖高效降解为木糖，对半纤维素的工业应用具有潜在价值。
本发明涉及一种高效、快速、免酶切的线性表达载体，及其快速、完整表达蛋白的方法。本方法所提供的无需酶切的线性表达载体含有两个单链粘性末端，分别含有由12和14个核苷酸组成的单链，并含有T7启动子。克隆目的基因时，以带有特异核苷酸的基因片断为引物引物，通过D N A聚合酶进行P C R扩增，然后通过T4D N A聚合酶，产生具有单链的粘性末端。目的基因与线性表达载体带有互补的单链粘性末端，能够在常温迅速连接。本发明操作简单，无需限制性酶切，载体与基因连接效率高，重组蛋白带有HIS-标签，并能通过凝血酶酶切去除，保持蛋白的原始氨基酸序列。本发明能够作为平台技术，用于基因的快速表达、重组蛋白的大量生产。
