本发明涉及基因工程领域,具体涉及胃蛋白酶抗性和耐酸性提高的植酸酶YeAPPA突变体及其编码基因和应用,氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的植酸酶的第99位的亮氨酸突变为丙氨酸,第162位的亮氨酸突变为甘氨酸,和/或第230位的谷氨酸突变为甘氨酸。相比于野生型,本发明的植酸酶YeAPPA的突变体的胃蛋白酶抗性和耐酸性明显提高,在动物生产中具有很大应用潜力。
本发明提供了一种磷脂酶C突变体、制备方法及其应用,该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。该突变体是将源自蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)HSL3野生型磷脂酶C的第96位苯丙氨酸F突变成精氨酸R;第153位谷氨酰胺Q突变成脯氨酸P。与野生型重组PLC相比,该突变体的热稳定性得到了显著改善,最佳反应温度从80℃提高到90℃,是目前报道的最高反应温度;在该温度下孵育50min仍可保留56%左右的酶活。该突变体的kcat和kcat/Km分别是野生型的5.64倍和2.37倍,且对底物的适应性也有所改善。同源建模分析表明,突变导致无规则卷曲比例下降并抑制了特定loop的活动,从而显著提高突变体的热稳定性和活性。