[发明专利]新颖的细胞信号多肽和核酸

说明书

发明背景

促细胞分裂剂活化的蛋白激酶(MAPK)途径介导各种调节从酵母到哺乳动物的生物体细胞生长和分化以及应激反应的信号(Lewis等《癌症研究进展》74：49-139，1998)。这些途径由激酶级联组成：丝氨酸/苏氨酸激酶MAPKKK，它磷酸化和活化双特异性激酶MAPKK，后者进而能够将磷酸根转移到第三种酶MAPK的苏氨酸和酪氨酸上。MAPK随后磷酸化和活化转录因子，其中包括各种底物。在哺乳动物中，原型MAP激酶级联是由Ras开始的(Howe等《细胞》71：335-342，1992)，包括Raf、MEK和ERK(Lewis等《癌症研究进展》74：49-139，1998)。在酿酒酵母中，最具特征的MAP激酶级联是响应交配信息素的级联。在该系统中，Ste11是MAPKKK，它活化Ste7，后者是MEK的副本，进而活化两种功能上多余的MAPK，即Fus3(Elion等《细胞》60：649-664，1990)和KSS1(Courchesne等《细胞》58：1107-1119，1989)。我们和其他人(Freed等《科学》265：1713-1716，1994；Irie等《癌症研究进展》265：1716-1719，1994)以前已经指出，由该系统基因失效所致Ste11的丧失在功能上能够得到活性哺乳动物Raf蛋白及其底物MEK的补充。该杂合MAP激酶途径与交配信息素的刺激作用没有联系，响应Raf或MEK活化剂，后者具有可在缺少组氨酸的培养基上生长的HIS3基因表达。

附图的简要说明

图1是阐述用于鉴定和克隆SRK的策略的图解。

图2显示编码人SRK的核苷酸和氨基序列。

图3A和图3B显示使用SRK cDNA所进行的RNA印迹分析。

图4显示SRK突变体降低Ras导致转化灶的能力。

图5是HAX-1的不同片段图解。

图6是显示在HAX-1复合体中发现SRK-WT和SRK-KA的数据。

图7显示HAX-1的氨基酸和核苷酸序列。

发明的详细说明

新颖的核酸和多肽序列已被鉴定，它们编码存活调节激酶(以下称之为“SRK”)，这是一类参与细胞信号转导途径的蛋白质，例如促细胞分裂剂活化的蛋白激酶途径。SRK、其片段和其衍生物具有一种或多种下列生物活性，包括但不限于：蛋白激酶活性；自磷酸化活性；细胞生长调节活性；细胞存活促进活性；HAX-1结合活性；编程性细胞死亡抑制活性；MAPKK活化或刺激活性；核导向活性；和SRK特异性致免疫活性。

蛋白激酶活性例如指SRK、其片段或其衍生物能够催化这样一种反应，其中磷酸基从磷酸供体转移到磷酸受体氨基酸残基上，优选地转移到丝氨酸或苏氨酸的羟基侧链上。SRK蛋白激酶活性的底物例如包括自身、MBP和BAD。SRK的蛋白激酶活性类似于MAPKKK的活性，例如Raf(Bonner等《核酸研究》14(2)：1009-1015，1986)、Muk(Hirai等《癌基因》12：641-650，1996)、TAK1(Irie《科学》165：1716-1719，1994)和MLK(Dorow《欧洲生物化学杂志》213：701-710，1993)。蛋白激酶活性能够用常规方法鉴定，例如公开在Bagrodia等《生物化学杂志》270：27995-27998，1995；Coso等《细胞》81：1137-1146，1995和下面的实施例中。术语“自磷酸化”指SRK能够在蛋白激酶反应中兼任催化剂和底物。

SRK也具有对HAX-1(与HS1缔合的X-1蛋白)类蛋白质的结合活性。这种活性能够用任何适当的方式加以测量。例如，可以利用一种体内测定法，其中采用酵母双杂种筛选，以检测SRK与HAX-1之间的结合活性。例如参见Braselmann和McCormick《欧洲分子生物学组织杂志》14：4839-4848，1995；Chien等《美国国家科学院院报》88：9578-9582，1991；Fields和Song《自然》340：245-246，1989。结合活性也能够用体外方法检测。SRK、其片段或其衍生物能够在有效发生结合的条件下与HAX-1肽(全长HAX-1或其生物学活性片段)结合。SRK或HAX肽能够在可检测的水平上加以标记。测定法可以在液相中完成，其中在珠粒上分开结合的和游离的配体，或者根据需要，测定法也可以在固相中完成。固相测定法可以利用免疫荧光等进行。