[发明专利]新的人黑素瘤生长相关因子、其编码序列及制法和用途

说明书

本发明涉及一种新的多核苷酸，由该多核苷酸编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产。更具体地说，本发明的多肽被命名为黑素瘤生长相关因子1(melanoma growth related factor-1，简称为“MGRF-1”)。

视黄酸(RA)可引起多种肿瘤细胞生长停滞及分化(Amos B.，et a1，1990，Methods Enzymol 190：217-225)。经RA处理的小鼠黑色素瘤细胞株S91在24小时内细胞生长停滞，然后重新分化为良性的黑色素细胞(Lotan R.，et al，1981 Ann.N.Y.Acad.Sci.359：150-170)。RA的抑制效应通过与特殊的核内受体--视黄酸受体(retinoic acid receptor，RAR)结合而介导。在此途径中，RAR通常还与RxR(retinoid X receptor)形成异二聚体复合物，这个复合物通过与特定靶基因上的RA响应元件结合从而调节靶基因的表达水平(Glass C.K.，et al，1991，DNA CellBiol 10：623-638)。目前对RAR靶基因还知之甚少，而鉴定此类靶基因将为揭示黑色素瘤乃至其他癌症的致病机制提供重要依据。

为了鉴定此类受RA调控的靶基因，1997年Spanjaard等人用视黄酸处理小鼠S91黑色素瘤细胞株，然后运用消减杂交的方法寻找在视黄酸处理前后S91细胞中差别表达的基因(Spanjaard R.A.et al，1997，Cancer Research 57：5122-5128)。在找到的四个表达有差异的基因中，表达下调的基因有两个(克隆5d和克隆10d)：克隆5d是已知的细胞周期蛋白cyclin D1基因；克隆10d与人BM28(CDCL1)基因同源。两个表达上调的基因是克隆7u和克隆13u，这是两个全新的基因，分别编码了含244和300个氨基酸的两个蛋白。基因7u在增殖的黑色素瘤细胞中几乎不能检测到表达，而在经视黄酸处理后生长停滞的S91细胞中表达量增大了7.1倍；对于基因13u，表达量增大了2.3倍。Northern杂交分析表明，基因7u主要在大肠中表达；而基因13u主要在睾丸中表达。尽管基因7u和13u是否是受RA直接作用的靶基因以及它们是否对黑色素瘤具有抑制作用还不清楚，但它们的受RA诱导的表达现象以及其组织特异性的表达模式说明这两个基因可能在黑色素瘤的生成过程中发挥重要的生理作用(Spanjaard R.A.et al，1997，CancerResearch 57：5122-5128)，是可能的黑色素瘤相关基因。

本发明的一个目的是提供一种新的多核苷酸，该多核苷酸编码人黑素瘤生长相关因子-1的蛋白，本发明新的人基因被命名为人MGRF-1。

本发明的另一个目的是提供一种新的人黑素瘤生长相关因子，该蛋白被命名为人MGRF-1蛋白。

本发明的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的新的人MGRF-1的方法。

本发明还涉及这种人MGRF-1核酸序列和多肽的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括：编码具有人MGRF-1蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸5-805位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.3中从核苷酸5-805位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.4所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.3从核苷酸5-805位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离的人MGRF-1蛋白多肽，它包括：具有SEQ ID NO.4氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.4序列的多肽。

在本发明的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。

在本发明的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。

在本发明的另一方面，提供了一种产生具有人MGRF-1蛋白活性的多肽的方法，该方法包括：

(a)将编码具有人MGRF-1蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人MGRF-1蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.3中从核苷酸5-805位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成人MGRF-1蛋白的重组细胞；

(c)在适合表达人MGRF-1蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；