[发明专利]从克隆的核苷酸序列制备减毒呼吸道合胞病毒疫苗的方法

权利要求书

1．一种分离的感染性重组呼吸道合胞病毒RSV，其包含RSV基因组或反基因组、主要核衣壳蛋白N、核衣壳磷蛋白P、大聚合酶蛋白L和RNA聚合酶延伸因子，其中重组RSV至少有两个减毒突变，其中一个突变导致RSV聚合酶基因中氨基酸Phe₅₂₁、Gln₈₃₁、Met₁₁₆₉或Tyr₁₃₂₁处的温度敏感型取代，或基因M2的基因起始序列中的温度敏感型核苷酸取代。

2．根据权利要求1所述的RSV，它至少有三个减毒突变。

3．根据权利要求1所述的RSV，其中Phe₅₂₁或Gln₈₃₁被Leu取代。

4．根据权利要求1所述的RSV，其中Met₁₁₆₉被Val取代。

5．根据权利要求1所述的RSV，其中Tyr₁₃₂₁被Asn取代。

6．根据权利要求1所述的RSV，其中至少两个突变选自Phe₅₂₁、Gln₈₃₁、Met₁₁₆₉和Tyr₁₃₂₁处的温度敏感型取代。

7．根据权利要求6所述的RSV，其中温度敏感型取代在Phe₅₂₁和Met₁₁₆₉处。

8．根据权利要求6所述的RSV，其中温度敏感型取代在Gln₈₃₁和Tyr₁₃₂₁处。

9．根据权利要求1所述的RSV，其中两个突变发生在编码Phe₅₂₁、Gln₈₃₁、Met₁₁₆₉或Tyr₁₃₂₁处温度敏感型取代的密码子中。

10．根据权利要求1所述的RSV，它以10³-10⁶PFU的减毒病毒的剂量来配制。

11．根据权利要求1所述的RSV，它还包括一个核苷酸修饰，该修饰可导致选自生长能力改变、减毒作用、温度敏感性、冷适应性、小噬斑、宿主范围限制性或免疫原性改变的表型。

12．根据权利要求11所述的RSV，其中SH、NS1、NS2或G基因被修饰。

13．根据权利要求12所述的RSV，其中SH基因缺失。

14．根据权利要求12所述的RSV，其中NS2基因与SH基因在位置上相互替换。

15．根据权利要求11所述的RSV，其中所述其它核苷酸修饰是对顺式作用调节序列，该调节序列被修饰或在RSV基因组或反基因组中被重排。

16．根据权利要求15所述的RSV，其中顺式作用调节序列被异源调节序列代替。

17．根据权利要求16所述的RSV，其中异源调节序列是不同RSV基因的顺式作用调节序列。

18．根据权利要求11所述的RSV，其中核苷酸修饰选自：在选定基因中引入终止密码子，或相对选定基因的序列、位置的改变，或GS或GE转录信号的存在发生改变。

19．根据权利要求11所述的RSV，其中核苷酸修饰包括RSV基因组或反基因组中翻译起始密码子序列前后中的插入、缺失或改变。

20．根据权利要求11所述的RSV，其中一个RSV亚组病毒中编码免疫原性F或G蛋白的基因或基因片段被引入不同RSV亚组病毒的基因组或反基因组中。

21．根据权利要求11所述的RSV，其中RSV基因组或反基因组被修饰成可编码非RSV分子，这些非RSV分子选自：细胞因子、T辅助表位、限制性位点标记、或能够引发哺乳动物宿主中保护性免疫应答的微生物病原体蛋白。

22．根据权利要求11所述的RSV，它包含代替RSV中相应的基因或基因片段的来自PIV的基因或基因片段。

23．根据权利要求22所述的RSV，其中PIV基因或基因片段编码HN或F糖蛋白。