[发明专利]编码具有犁头霉属脂酶活性的多肽的核酸

说明书

本发明涉及编码具有犁头霉属脂酶活性的多肽的分离的核酸序列。本发明还涉及包括所述核酸序列的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及用于制备所述多肽的重组方法。

已知用脂解酶制成的洗涤剂具有改进的除去脂肪污渍的特性。例如，已将获自疏棉状高温霉(Thermomyces lanuginosus)(又被称为疏棉状腐质霉(Humicola lanuginosa))真菌的一种微生物脂酶LIPOLASE^TM(Novo Nordisk A/S,Bagsvaerd,Denmark)引入多种商业品牌的洗涤剂中。

还有人提出将获自洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)(US4,876,024)、链霉菌属(Streptomycetes)(WO 94/14940)和卵形孢球托霉(Gongronella butleri)菌株NRRL 3521(US 3,634,195该菌株以前被称作卵形孢犁头霉(Absidia butderi)，参见K.H.Domsch等，Compendinm of Soil Fungi,Academic Press 1980,p.381)的其它微生物脂酶用于洗涤剂中。

美国专利US3,634,195被披露了用柱孢犁头霉根状变种(Absidiacylindrospora var.rhizomorpha)NRRL 2815和Absidia blakes leeanaNRRL 1305制备脂酶。Koritala等披露(1987,Journal of theAmerican Oil Chemists Society 64:509-513)，大豆油在与蓝色犁头霉(Absidia coerula)NRRL 5926和分枝犁头霉(Absidia ramosa)NRRL1309一起培养时可被部分水解。Satyanarayana(1981,Current Science50:680-682)披露，伞枝犁头霉(Absidia corymbifera)菌株可分泌脂酶。Aisaka等(1979,Agricultural Biological Chemistry 43:2125-2129)披露，可由透孢犁头霉(Absidia hyalospora)菌株KY 303(现被称作Absidiablakesleeana)生产脂蛋白脂酶。

很多洗涤剂在溶液中呈碱性(例如，pH10左右)，并含有能结合Ca⁺⁺离子的助剂。需要一种在没有Ca⁺⁺、高pH下具有高活性的新型脂解酶。犁头霉属的脂酶具有上述特性，因此，将其用于洗涤剂配方中十分理想。不过，迄今为止，尚没有重组生产上述酶的方法。

本发明的一个目的是提供重组制备上述有价值的酶的方法。

本发明涉及编码具有脂酶活性的多肽的分离的核酸序列，该核酸序列选自：

(a)编码一种犁头霉属菌株的内源多肽的核酸序列，该多肽具有序列2、序列4、序列6、序列8或序列10所示的氨基酸序列；

(b)一种犁头霉属菌株的内源核酸序列，它能在中等严格的条件下与(ⅰ)序列1、序列3、序列5、序列7或序列9所示核酸序列或(ⅱ)其任何互补链杂交；

(c)一种核酸序列，它能在中等严格的条件下与(ⅰ)序列1、序列3、序列5、序列7或序列9所示核酸序列或(ⅱ)其任何互补链杂交；

(d)一种编码具有脂酶活性的多肽的核酸序列，该多肽的氨基酸序列与序列2、序列4、序列6、序列8或序列10所示氨基酸序列的同一性至少为65％；

(e)(a)、(b)、(c)或(d)的等位形式；和

(f)(a)、(b)、(c)、(d)或(e)的片段。

本发明还涉及含有所述核酸序列的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及制备所述多肽的重组方法。

图1表示源于Absidia griseola和Absidia griseola var.iguchii基因组DNA的脂酶特异性PCR产物的琼脂糖凝胶纯化结果。1泳道：HindⅢ-消化的λDNA和HaeⅢ-消化的φX17RF-DNA大小标准物；2泳道：Absidia griseola PCR产物；3泳道：Absidia griseola var.iguchii的PCR产物。两种PCR产物的大小似乎均大致为870bp。